傅英昳

哈药集团世一堂制药厂 150000

宫血停颗粒质量标准的探究

傅英昳

哈药集团世一堂制药厂 150000

目的：明确宫血停颗粒的质量控制方法。方法：以TLC法对整机中的墨旱莲和益母草进行鉴别，并以HPLC-ELSD法对制剂中的黄芪甲苷进行含量测定。结果：通过含量测定，黄芪甲苷在0.20-2.50μg之间保持良好的线性关系，宫血停颗粒中黄芪甲苷的平均回收率为101.0%，RSD值为1.7%。结论：此种鉴别方式在实际应用中能够实现准确高效分离，具有简便性和有效性，在宫血停颗粒的质量评价中具有良好的应用价值。

宫血停颗粒；薄层色谱法；HPLC-ELSD

宫血停颗粒是一种中药复方制剂，主要由黄芪、升麻、党参、益母草以及当归等组成，在临床上具有补益脾肾、活血化瘀的功效，在气虚血瘀所导致的月经过多以及崩漏等方面具有较好的临床治疗效果。为了对宫血停颗粒进行有效的质量控制，本文就此展开实验亚久，建立薄层色谱鉴别方法，并采用HPLC-ELSD法对黄芪甲苷进行含量测定，以明确宫血停颗粒的质量控制方法，从而保证药品质量，提高临床用药安全性。

1 仪器与试药

1.1 仪器

本次实验研究中，以HP1100高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器作为主要实验仪器，并进行空气泵、电子天平等配合开展实验研究。

1.2 样品

以选自哈药集团世一堂制药有限公司的宫血停颗粒作为实验样品，样品共10个批次。

1.3 试剂与试药

在本次实验研究中，流动相试剂为色谱纯，其余试剂与试药均为分析纯。旱莲苷A对照品、（批号111886-201001）墨旱莲对照药材（批号958-200203）盐酸水苏碱对照品（批号110712—2000508）益母草对照药材（批号120912-200306）黄芪甲苷对照品（批号0781—200311）来源：均购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

为保证墨旱莲鉴别准确性，在实际操作过程中取含量测定项下供试品溶液5批作为供试品溶液，将适量甲醇加入旱莲苷A对照品中，制成标准含量的对照品溶液，其规格为每1ml含有0.5mg旱莲苷。之后，取墨旱莲对照材料2g，加入标准比例乙醇进行超声处理，待45min后滤过，取续滤液作为对照药材溶液。取含量按A对照品2.5mg以及宫血停颗粒2.5g，加以处理后制成加样回收溶液。取墨旱莲对照药材2g制成供试品后，依照含量测定方法制成阳性供试品溶液。在此基础上，依照处方量比例制成宫血停颗粒，其中不含墨旱莲，依照供试品溶液制备方式制成阴性供试品溶液。

按照《中国药典》2010年版中的薄层色谱发开展试验，取所制备10种溶液各5μl，滴于同一硅胶G薄层板上，选用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水作为展开剂，将溶液展开后取出晾干，并喷以标准比例的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热处理，5分钟后取出，于日光下对其质量进行检查。通过观察对比可知，供试品溶液、阳性供试品溶液、加样回收溶液色谱中，其与墨旱莲对照药材、旱莲苷A对照品色谱相应位置上所显斑点颜色相同，阴性供试品溶液对墨旱莲药材的鉴别不存在干扰情况。

在益母草鉴别过程中，取本品2.5g（无糖型），加70%乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用稀盐酸调节pH值至1～2，通过732钠型阳离子交换树脂柱（内径为2cm，柱高为15cm），用水洗脱至洗脱液无色，弃去洗脱液，再用氨溶液（2→13）250ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加70%乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取益母草对照药材2g，按供试品处理方法，制成对照药材溶液。同时，按处方量比例制成不含益母草的宫血停颗粒，然后按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮—无水乙醇—盐酸（10：6：1）为展开剂，展开，取出，晾干，在105℃加热15分钟，放冷，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘干，喷以稀碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液（10：1）混合溶液至斑点显色清晰，晾干。供试品色谱中，在与益母草对照药材，盐酸水苏碱对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，处方中其他成分对益母草药材的鉴别无干扰。

2.2 含量测定

在本次实验研究中开展含量测定相关操作时，应当明确色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，选用乙腈-水（32:68）作为流动相，以蒸发光散射器作为主要检测器进行检测。依照实验标准以黄芪甲苷对照品作为主要材料，加入适量甲醇后制备出标准含量的对照品溶液。在此基础上，取宫血停颗粒5g，加入甲醇溶液，并进行回流、放冷、滤过等凡是进行处理，将滤液蒸干残渣加水溶解，饱和后进行振摇提取，合并正丁醇液，以氨试液洗涤后，将正丁醇液蒸干，加甲醇加入残渣内进行溶液转移，再加甲醇进行摇匀、滤过，取出滤液，即可得到供试品溶液。密吸取对照品溶液 2μl，5μl，供试品溶液 10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算。

按处方量比例制成不含黄芪的宫血停颗粒，然后按照供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液，按上述色谱法测定，结果表明宫血停颗粒中其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰。精密量取对照品溶液5μl，重复进样5次测定峰面积，RSD值为1.1%（n=5）。在稳定性试验方面，取供试品溶液，隔2h进样1次，连续进样6次，测定峰面积，计算含量，RSD值为 1.3%，显示黄芪甲苷在至少14h内稳定。

之后开展重复性试验，取同一批号样品（1107507）6份，分别按样品含量测定法测定峰面积，计算含量，结果RSD值为2.4%（n=6）。在回收率试验过程中，精密称定已知含量样品的宫血停颗粒6份（批号1107507），精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.00ml，按含量测定法测定得峰面积，并计算含量，平均回收率为101.0%，RSD值为1.7%。

通过线性分析可知，黄芪甲苷在 0.20～2.50μg之间，其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系。就其范围来看，取宫血停颗粒9份，取样量分别为含量限度计算样品取样量的0.5、1、1.5倍（批号1107507），按含量测定法对9份样品分别进行含量测定，测定结果的RSD值为1.8%。在此基础上开展样品含量测定，按含量测定法对10批样品分别进行黄芪甲苷含量测定，测定结果为每袋1.73～2.24mg之间。

3 讨论

3.1 流动相的选择

通过实验研究可知，在C18柱色谱条件下，溶剂系统所使用乙腈-水（36：65）作为流动相，并未获得理想的分离效果，而采用乙腈-水（32:68）黄芪甲苷与并存杂质的分离效果明显，对实验研究的进一步开展具有重要意义。

3.2 耐用性

在本次实验研究中，通过对三种型号不同的色谱柱进行对比分析，可知三种色谱柱的分离效果较好，三种色谱柱型号分别如下：Waters Symmetry C18 5μm4.6*250mm；DikmaC18 5μ m4.6*250mm；AgilentExtendC18 5μm4.6*150mm。

3.3 供试品处理方法的研究

在本次实验研究中，取相同批次宫血停颗粒作为对象，依照含量测定标准对处理方法和时间进行调整，依据测定结果进行观察和分析可知，在标准的供试品处理方法下，能够获得较好的回流超声效果，并且在不同的回流时间下，实际超声效果存在的差异较小，因此在宫血停颗粒质量控制过程中，在供试品的处理上，可以以1小时为最佳回流时间。

[1]王宪平，张胜波，笔雪艳，张清波 宫血停颗粒质量标准的研究[J].《黑龙江医药》,2013, 26(3):382-385

[2]谢守兰，李炜，冯敏，王海亮 HPLC-ELSD法测定宫血停颗粒中黄芪甲苷的含量[J].《西北药学杂志》, 2008, 23(3): 148-149

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