陈旭玉，钟锦玲，黄 娴，甘炳春

(1.中国医学科学院﹠北京协和医学院，药用植物研究所海南分所(海南省南药资源保护与开发重点实验室),海南万宁 571533；2.中国医学科学院﹠北京协和医学院，药用植物研究所，北京 100193；3.岭南师范学院，广东湛江 524048；4.海南碧凯医药研究所，海南海口 570216)



温郁金根腐病生物药剂的筛选

陈旭玉1,2，钟锦玲3，黄 娴4，甘炳春1*

(1.中国医学科学院﹠北京协和医学院，药用植物研究所海南分所(海南省南药资源保护与开发重点实验室),海南万宁 571533；2.中国医学科学院﹠北京协和医学院，药用植物研究所，北京 100193；3.岭南师范学院，广东湛江 524048；4.海南碧凯医药研究所，海南海口 570216)

摘要[目的]筛选温郁金根腐病有效的生物药剂。[方法]采用生长速率法测定7种生物药剂对温郁金根腐病病原菌的室内毒力。[结果] 0.5%施特灵氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP对根腐病菌抑制作用较好，其EC50值分别为1.14和 3.61 mg/L；其次为3%中生菌素、3%氨基寡糖素和荧光假单胞杆菌，EC50分别为11.64、13.52和16.61 mg/L。[结论] 0.5%施特灵氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP对温郁金根腐病菌具有较好的抑制作用，可进一步用于大田试验。

关键词温郁金；根腐病；生物药剂；筛选

温郁金(CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)是姜科姜黄属多年生草本植物, 其根茎可作为莪术入药[1]，是保妇康栓的主要原料。温郁金引入海南种植多年，随着种植面积扩大，病虫害发生越严重[2]。根腐病是温郁金主要病害之一，主要发生在根茎部，发病初期侧根呈水渍状，后黑褐腐烂，并向上蔓延导致地上部分发黄，最后全株枯死[3]。温郁金根腐病6月开始被发现，7月达到高峰，连作严重的地块发病率达50%，温郁金根腐病问题日益突出。目前，对温郁金根腐病的报道和防治措施有限，造成产量降低及品质下降，因此，对其的防治任务十分紧迫。为此，笔者研究了几种生物药剂对温郁金根腐病菌的抑制作用，旨在为该病害的大田防治提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1供试菌。 温郁金根腐病病原菌由中国医学科学院药用植物研究所海南分所分离并置于4 ℃冰箱保存。

1.1.2供试生物药剂。生物药剂种类、厂家及使用浓度见表1。

表1　供试生物药剂及使用浓度

1.2方法

1.2.1培养基配制。含药平板培养基：将表1中不同药剂分别用无菌水配制成所需各浓度的50倍，用移液枪取2 mL注入冷却至约50 ℃的48 mL PDA培养基，轻轻摇匀。每个浓度3次重复，另设清水对照。

1.2.2室内毒力测定。采用生长速率法[4]测定抑制效果。

1.2.3公式计算。将抑制率换算成机率值，药剂浓度换算成浓度对数，以设定的药剂浓度的对数为横坐标，抑制机率值为纵坐标，采用Excel软件求出各药剂毒力回归方程、EC50值和相关系数。

2结果与分析

2.1供试生物药剂对温郁金根腐病病原菌生长的影响由表2可知，7种生物药剂在设定的质量浓度范围内对菌丝的生长均有不同程度的抑制。随着浓度增加，菌落直径减小，药剂对病菌的抑制增大，药剂浓度与抑制率呈正相关。在7种生物药剂中，当相同的质量浓度范围为6.25~100.00 mg/L时，3%氨基寡糖素表现出较高的抑菌率,为80.4%；3%中生菌素次之，抑菌率为76.4%。在质量浓度为1 000.00 mg/L时，蜡质芽孢杆菌和99%恶霉灵的抑菌率均为100%，病菌生长完全受到限制。

表27种生物药剂对温郁金根腐病病原菌生长的影响

Table 2Effects of seven biological agents on pathogenic bacteria growth in root rot disease ofC.wenyujin

生物药剂Biologicalagents处理剂量Treatmentdosagemg/L菌落直径Colonydiametermm抑菌率Bacteriostasisrate%清水对照Blankcontrol73.803%中生菌素100.0017.4076.43%Zhongshengmycin50.0023.2868.525.0026.0864.712.5034.2353.66.2545.9837.7蜡质芽孢杆菌1000.000100Bacilluscereus500.0018.4075.1250.0029.5560.0125.0047.8335.262.5049.2833.23%氨基寡糖素100.0014.5080.43%amino-oligosaccharins50.0022.5569.425.0022.8369.112.5026.5064.16.2556.9022.9哈茨木霉菌WP1000.009.1887.6TrichodermaharzianumWP500.0010.1086.3250.0010.8585.3125.0011.8883.962.5024.5066.8荧光假单胞杆菌1000.0016.0378.3Pseudomonasfluorescens500.0019.6373.4250.0020.7571.9125.0026.0864.762.5029.8859.599%恶霉灵1000.00010099%hymexazol500.0013.8881.2250.0013.9581.1125.0018.2875.262.5018.3375.10.5%施特灵氨基寡糖素AS100.0018.7374.60.5%Shitelingamino-50.0020.2072.6oligosaccharinsAS25.0023.5068.212.5028.7061.16.2534.9852.6

2.2供试生物药剂对温郁金根腐病菌菌丝的室内毒力由表3可知，0.5%施特灵氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP的EC50值较小，分别为1.14和3.61 mg/L；其次为 3%中生菌素、3%氨基寡糖素和荧光假单胞杆菌，其EC50值分别为11.64、13.52、16.61 mg/L，表现均较敏感。99%恶霉灵和蜡质芽孢杆菌对温郁金根腐病菌的毒力相对较弱，其EC50值分别为70.00和145.65 mg/L。

表3 7种生物药剂对温郁金根腐病菌的室内毒力

Table 3Effects of seven biological agents on indoor toxicity of root rot disease ofC.wenyujin

生物药剂Biologicalagents毒力回归方程Toxicityregressionequation相关系数Correlationcoefficient(r2)EC50mg/L3%中生菌素3%Zhongshengmyciny=0.8160x+4.13030.956811.64蜡质芽孢杆菌Bacilluscereusy=2.5521x-0.52090.8034145.653%氨基寡糖素3%amino-oligos-accharinsy=1.1103x+3.74410.754213.52哈茨木霉菌WPTrichodermaharzianumWPy=0.5133x+4.71390.70213.61荧光假单胞杆菌Pseudomonasfluorescensy=0.4424x+4.46010.974416.6199%恶霉灵99%hymexazoly=2.9397x-0.42410.548470.000.5%施特灵氨基寡糖素AS0.5%shitelingamino-oligosaccharinsASy=4.9998x+4.71960.95551.14

3结论

试验结果表明，7种生物药剂对温郁金根腐病菌的毒力测定有差异。从EC50来看，各药剂的毒力大小依次为0.5%施特灵氨基寡糖素AS、哈茨木霉菌WP、3%中生菌素、3%氨基寡糖素、荧光假单胞杆菌、99%恶霉灵、蜡质芽孢杆菌， 其中0.5%施特灵氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP对病菌菌丝的抑制效果最好，其次是3%中生菌素。因此，哈茨木霉菌WP和0.5%施特灵氨基寡糖素AS对温郁金根腐病菌具有较好的抑制作用，可进一步用于大田试验。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国药典: 一部[S]. 北京: 化学工业出版社, 2000：230.

[2] 黄娴,陈旭玉. 温郁金弯孢霉叶枯病病原菌的药剂筛选[J].安徽农业科学,2014,42(8):2345-2346.

[3] 杨三豹，卢启强.温郁金优质高产栽培技术[J].温州农业科技,2004(2):24-25.

[4] 方中达.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社, 1998:62-344.

Screening for Biological Pesticides against Root Rot Disease onCurcumawenyujin

CHEN Xu-yu1,2, ZHONG Jin-ling3, HUANG Xian4, GAN Bing-chun1*(1. Hainan Branch Institute of Medicinal Plant (Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine), Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Wanning, Hainan 571533; 2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100193; 3. Lingnan Normal University, Zhanjiang, Guangdong 524048; 4. Hainan Bikai Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd, Haikou, Hainan 570216)

Abstract[Objective] To screen out effective biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujin. [Method] We determined the indoor toxicity of seven kinds of biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujinby mycelium growth rate method. [Result] The toxicological tests showed that 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP had strong activity against mycelia growth, and theirEC50values were 1.14 and 3.61 mg/L, respectively. Secondly, 3% Zhongsheng mycin WP, 3% amino-oligosaccharin AS andP.fluorescensWP also had activity against the mycelia growth, and theirEC50values were 11.64, 13.52 and 16.61 mg/L, respectively. [Conclusion] The 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP have good inhibition to the pathogen of root rot, so they can be used in field trials.

Key wordsCurcumawenyujinChen et C. Ling; Root rot; Biological pesticides；Screening

收稿日期2015-12-25

作者简介陈旭玉(1981- )，女，海南临高人，副研究员，硕士，从事药用植物保护及微生物资源开发研究。*通讯作者，研究员，从事病虫害防治研究。

基金项目国家科技重大专项 (2012ZX09304006)；海南省重大专项 (ZDZX2013008)；国家基本药物所需中药原料资源调查和监测项目[国中医药科技中药便函(2012)157、158号]。

中图分类号S 482.2+92

文献标识码A

文章编号0517-6611(2016)02-192-02