王超奇　侯建全　欧阳骏　袁和兴

(苏州大学附属第一医院，江苏　苏州　215006)



蛋白P27、Survivin和骨桥蛋白在前列腺癌组织中的表达和意义

王超奇侯建全欧阳骏袁和兴

(苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006)

〔摘要〕目的探讨蛋白P27、Survivin和骨桥蛋白(OPN)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化技术对PCa和癌旁组织标本中的蛋白P27、Survivin和OPN进行分析。结果80例PCa组织中，蛋白P27、Survivin、OPN阳性表达率与癌旁组织，差异显著(P=0.015)；P27表达与PCa病理分期(P=0.026)、临床分期(P=0.037)和有无淋巴结转移(P=0.033)有关，；Survivin表达与PCa病理分期(P=0.041)、临床分期(P=0.039)和有无淋巴结转移(P=0.031)有关，OPN表达与PCa病理分期(P=0.023)、临床分期(P=0.034)和有无淋巴结转移(P=0.027)有关；P27和Survivin，P27和OPN在PCa组织中表达呈负相关(P<0.001)。结论临床中联合检测蛋白P27、Survivin和OPN为前列腺癌的防治和治疗提供一种治疗策略。

〔关键词〕前列腺癌；蛋白P27；蛋白Survivin；骨桥蛋白(OPN)

第一作者：王超奇(1978-)，男，主治医师，博士在读，主要从事泌尿系肿瘤基础与临床研究。

美国一家科研机构在对一些老年男性患者(50周岁以上)死亡的尸体解剖中得出，前列腺癌(PCa)的患病率为10%～45%〔1〕，患者的年龄越大，发病概率就越高；其中，80周岁以上的老年男性有一大部分存在着PCa，在全球约有26万人每年因为这种肿瘤而丧生。PCa在男性患者全身系统肿瘤中其死亡率达到第2位，与肺部恶性肿瘤几乎等同〔2〕。近来随着我们生活环境和饮食结构的变化，一些高危因素的增加，PCa的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，与西方国家的PCa患病率逐步接近。本文探讨蛋白P27、Survivin和骨桥蛋白(OPN)在PCa组织的表达情况和三者之间的关系。

1资料与方法

1.1一般资料收集苏州大学附属第一医院2007年9月至2012年2月泌尿外科采取根治手术切除PCa组织标本共计80例，病人手术前未接受其他方式治疗，年龄55～85岁，中位年龄73岁。肿瘤组织采取2003年WHO标准：27例高分化PCa，53例中、低分化PCa。临床分期采用Whitmore法A期28例、B期15例、C期27例、D期10例，同时相应收集80例PCa患者癌旁组织为对照组，其组织取自肿瘤切线远离肿瘤组织2 cm。

1.2试剂来源P27抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品，抗Survivin 兔抗人北京中杉生物技术有限公司，骨桥蛋白OPN一抗购自Chemicon公司，SP试剂盒为美国Zymed公司产品，TRizol购自Invitrogen公司，RT-PCR 试剂盒购自上海中生公司。

1.3免疫组化方法选用Zymed公司S-P试剂盒，采用免疫组化 SP法操作，EnVision 染色，按照说明书进行如下操作。①切片脱蜡水化，续切片的制作；②抗原热修复处理，入Citrate 缓冲液(0.01 mol/L，pH6.0)，微波(MW)中火煮沸10 min；③蒸馏水冲洗后，入30 mol/L 过氧化氢5 min；④蒸馏水冲洗后，再经TBS缓冲液洗，加入一抗体 P27、OPN孵育 30 min；⑤TBS 缓冲液冲洗3次，每次 2 min加入 EnVision 孵育 30 min；⑥TBS液冲洗 3 次，每次 2 min，加 DAB 显色；⑦蒸馏水冲洗后，苏木素复染，TBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性组织作阳性对照。

1.4蛋白P27、Survivin和OPN组织表达对蛋白P27、Survivin和OPN在PCa和癌旁组织的表达进行测定，按照试剂盒说明书进行试验操作，肿瘤组织细胞质呈棕黄色或棕褐色为蛋白P27、Survivin和OPN阳性表达。参考文献〔3〕：0分表示为不着色，1分表示为淡黄色，2分表示为黄色，3分表示为棕褐色；显色细胞占计数细胞的百分率<15%表示为0分，15%～25%表示为1分，25%～55%表示为2分，>55%表示为3分，再把每一张切片平均着色程度评分与平均着色细胞百分率评分各自相乘为其最后得分：≤1分采用(-)表示为阴性，3～4分采用(+)表示为弱阳性，5～7分采用()表示为阳性，>7分采用()表示为强阳性〔4〕，其中一个“+”号至“”号都有临床意义。

1.5统计学方法采用SPSS19.0软件进行χ2检验和Spearman相关系数分析。

2结果

2.1蛋白P27，Survivin和OPN在PCa组织和癌旁组织阳性表达情况80例PCa组织中，蛋白P27阳性表达率为46.2%(37/80)，癌旁组织的阳性表达率为86.3%(69/80)，差异显著(P=0.015)；Survivin阳性表达率为66.3%(53/80)，癌旁组织为0.0%(0/80)，差异显著(P=0.000)。OPN阳性表达率为76.3%(61/80)，癌旁组织为0.0%(0/80)，差异显著(P=0.000)，见图1。P27表达与PCa病理分期(P=0.026)、临床分期(P=0.037)和有无淋巴结转移(P=0.033)有关；Survivin表达与PCa病理分期(P=0.041)、临床分期(P=0.039)和有无淋巴结转移(P=0.031)有关，OPN表达与PCa病理分期(P=0.023)、临床分期(P=0.034)和有无淋巴结转移(P=0.027)有关，见表 1。

2.2蛋白P27和Survivin，P27和OPN在PCa组织的相关性Spearman相关系数分析显示P27与Survivin、P27与OPN表达显负相关(r=-0.143,r=-0.185,P<0.001)。

图1　P27、Survivin及OPN在PCa组织中的阳性表达(DAB，×200)

组别nP27阳性P值χ2值Survivin阳性P值χ2值OPN阳性P值χ2值病理分期 高分化27200.0264.941270.0414.573260.0235.583 中和低分化53172635临床分期 A期28160.0378.387110.0399.465180.0349.447 B期1571515 C期27101420 D期104138淋巴结转移情况 无35100.0334.540290.0315.927240.0278.943 有45272437

3讨论

本世纪初由科学家Conti等〔5〕发现了一种物质，它的主要功能就是调控肿瘤细胞周期同时它能抑制肿瘤细胞的分裂，这物质就是蛋白P27，这种因子主要对细胞周期起到负性调节的作用，调节细胞外负性殖信号增强，再向细胞内信息传递，抑癌基因的一种，细胞的增殖能力通过其高低表达反应，如果某个时期机体细胞被破坏的信息所影响，蛋白P27在这时候表达水平就表现为下降趋势，细胞周期的转换得以完成，组织内没有其他方式去阻止肿瘤组织细胞进行增殖、分裂，最后到恶性病变的产生。PCa组织中的蛋白P27的基因定位于12p12～13上。细胞周期蛋白依赖性激酶的活性被蛋白P27所抑制，在G1期细胞就会停滞增殖，使恶性肿瘤组织的增殖被停止，进而进入S期阻断，细胞增殖被抑制，这样就给机体细胞一定的时间去修复损伤的DNA或者DNA复制中产生的错误。细胞周期蛋白依赖性激酶活性就被抑制时，蛋白P27表达呈现下降趋势，使组织细胞能够顺利地完成细胞周期期的转化，加速机体细胞增殖，使机体恶性组织增殖，而Survivin蛋白是20世纪初由Ambrosini等〔6〕在人类基因库的杂交筛选中用效应细胞蛋白酶受体-1(EPR-1)cDNA分离出来的，Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族新的一员。到目前为止人类找到的最强的凋亡抑制因子是蛋白Survivin，蛋白Survivin仅在胚胎和肿瘤组织中有它的表达，胸腺组织、分泌期子宫、睾丸器官除外，在正常成人分化组织中Survivin蛋白不能被发现。在肿瘤组织中正常的细胞凋亡过程的能够被Survivin蛋白抑制，在肿瘤细胞中Survivin蛋白的表达越高，癌细胞凋亡被抑制的能力也就随之增强，肿瘤侵袭性随之加强，临近组织容易被恶性细胞侵及，最后肿瘤转移，病人的生存周期就会减少，即病人癌组织中的Survivin蛋白的高阳性表达，则预示患者预后不佳，恶性细胞凋亡能力被Survivin 蛋白抑制，和前列腺癌的远处转移有一定的联系〔7〕。肿瘤标志物Survivin有一定潜在的临床诊断价值，而OPN是近几年来医学专家来发现的一种蛋白，也就是我们所说的分泌型磷酸化糖蛋白，参与人体各种代谢，如：骨质代谢、机体免疫应答，血管反应等过程〔8~10〕。近几年发现，OPN的表达与恶性肿瘤的生长机制与远处转移都有一定联系〔11〕。对于患者患有晚期的前列腺癌，临床医师采取内分泌治疗，这样癌组织大小趋于减小，但如果患者所患肿瘤不是内分泌依赖型的，肿瘤在晚期出现临床转移，扩散到远处，前列腺癌晚期最经常的转移的组织是骨组织，OPN对肿瘤细胞的理化性质具有一定的影响。OPN不一定局限在骨骼组织中表达。蛋白OPN是一种非胶原性骨质蛋白，可以通过CD44整合及细胞的趋化作用、移动和黏着，这样对抑制肿瘤细胞的凋亡和恶性组织细胞过度生长都产生一定作用，人体许多肿瘤临床转移机制OPN都发挥一定作用〔12〕。本文结果说明在PCa组织中蛋白P27、Survivin和OPN可能起到相互的协同作用，但对于三者是否参与信号通路和免疫调节等很多方面尚不十分清楚，今后还需进一步研究。

4参考文献

1王超奇，田玉英，王金花.前列腺癌组织 clusterin与p27 及survivin表达临床意义的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2012；19(22)：1726-9.

2Revelos K，Petraki C，Scorilas A，etal.Correlation of androgen receptor status，neuroendocrine differentiation and angiogenesis with time-to-biochemical failure after radical prostatectomy in clinically localized prostate cancer〔J〕.Anticancer Res，2007；27：3651-60.

3林汝湘，王燕，张维东.AMACR联合 CK34BE12与 p63 在PCa早期诊断的应用现状〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2008；15(18)：1436-9.

4Macrì A，Versaci A，Lupo G，etal.Role of osteopontin in breast cancer patients〔J〕.Tumor，2010；95(1)：48-52.

5Conti M，Moutereau S，Zater M，etal.Urinary cystatin C as a specific marker of tubular dysfunction〔J〕.Clin Chem Lab Med，2010;444(3)：288-91.

6Ambrosini G，Adida C，Aleteri DC，etal.A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma〔J〕.Nat Med，2012;3：917-21.

7Jain A，McKnight DA，Fisher LW，etal.Small integrin-binding proteins as serum markers for prostate cancer detection〔J〕.Clin Cancer Res，2013;15(16)：5199-207.

8Standal T，Borset M，Sundan A.Role of osteopontinin adhesion，migration，cell survival and bone remodeling〔J〕.Exp Oncol，2012;26(3)：179-84.

9Strom A，Franzen A，Wangnerud C，etal.Altered vascular remodeling in osteopontin deficient at herosclerotic mice〔J〕.J Vasc Res，2010;41(4)：314-22.

10Li X，OR'egan AW，Berman JS.IFN-gamma induction of osteopontin expression in human monocytoid cells〔J〕.J Interferon Cytokine Res，2013;23(5)：259-65.

11张惠忠，刘金耿，魏一平，等.食管鳞癌 RhoC 和 OPN 蛋白的表达及其对患者预后的影响〔J〕.南方医科大学学报，2006;26(11)：1612-5.

12Grossmann ME，Huang H，Tindall DJ.Androgen receptor signaling in and rogen-refractory prostate cancer〔J〕.Natl Cancer Inst，2012;93：1687-97.

〔2015-11-07修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

通讯作者：侯建全(1960-)，男，主任医师，博士生导师，主要从事泌尿系肿瘤基础与临床研究。

基金项目：内蒙古自治区自然科学基金项目(No.2015M30877)

〔中图分类号〕R737.25

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)04-0806-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.016