郭永灿， 王友强， 魏 聪， 邓 冲， 赵 容， 邹 霞， 涂植光

HBV共价闭合环状DNA功能化纳米颗粒制备及鉴定

郭永灿1， 王友强1， 魏 聪1， 邓 冲1， 赵 容1， 邹 霞1， 涂植光2

目的 制备HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)功能化磁性纳米颗粒，为进一步建立富集分离和检测cccDNA方法奠定基础。 方法 通过亲和素修饰纳米颗粒表面，利用亲和素与生物素的亲和作用，将亲和素修饰的纳米颗粒与生物素标记的cccDNA特异性探针偶联，制备cccDNA功能化纳米颗粒，最后用cccDNA探针完全互补的荧光标记序列与功能化纳米颗粒反应，鉴定其特性。 结果 亲和素修饰的纳米颗粒能结合生物素最大量为1 205 ng/mg；通过与亲和素作用，生物素标记cccDNA特异性探针固定在磁性纳米微粒表面，其最大结合生物素标记探针量为3.2×10-9mol/mg；cccDNA功能化纳米颗粒可捕获与其互补的荧光标记寡核苷酸序列，其最大捕获量为2.0×10-9mol/mg，并能通过变性释放出保持生物学活性游离的荧光标记寡核苷酸序列。 结论 成功构建的cccDNA功能化纳米微粒能有效捕获与其互补的序列，其捕获量能达到cccDNA的分离提取要求。

*DNA，病毒； DNA，环状； 纳米粒子

近年来，纳米技术迅速发展，被广泛应用到生物医学各个研究领域。以纳米或微米级磁性粒子为载体的磁性分离技术主要利用固定在粒子表面的蛋白质或单链核苷酸探针的亲和作用与靶分子或互补序列结合，目标靶分子因与磁性粒子特异性结合后在磁场作用下，通过抗原-抗体或核酸分子杂交、分离、清洗等简便、快速操作，从复杂的生物体系中被分离[1]。……