梁乔

（辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164）

猪流行性腹泻的实验室诊断技术

梁乔

（辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164）

猪流行性腹泻于2010年在中国暴发并流行至今，该病发生范围广、强度大、致死率高，且常与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒等传染病混合感染，临床诊断并不能对该病确。本文介绍了目前常用的实验室诊断方法，旨在对该病的防控提供一定的技术依据。

1 病原学检测方法

1.1 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）

吴玉璐等针对PEDV的ORF3基因的缺失区设计引物，建立了可区分PEDV野毒株与疫苗株的RT-PCR诊断方法，其敏感性可达100TCⅠD50/0.1mL，该方法可通过电泳结果根据电泳条带大小即可得出结论。

1.2 环介导等温扩增技术（LAMP）

汤小真等针对PEDV的NP基因保守区设计了1套LAMP扩增引物，该方法可根据钙黄绿素显色肉眼可视化扩增结果，可检出的最低cDNAD的量是3.73Pg/μL，是RT-PCR方法检出量的10倍，该方法无需昂贵的仪器设备，适合基层养殖场实验室使用。

1.3 荧光RT-PCR检测方法

刘邓等根据PEDV的N基因设计了引物和探针，建立了能够快速检测出PEDV含量的TaqMan荧光定量PCR方法，敏感性为1×101 copies/μL，特异性好与其他猪的病毒无交叉反应。应用该方法对60份临床样品进行荧光RT-PCR和普通RT-PCR方法检测，结果表明建立的荧光RT-PCR方法检出率明显高于普通RT-PCR方法。

2 血清学检测方法

2.1 酶联免疫吸附试验（ELⅠSA）

ELⅠSA方法是血清学检测的经典方法之一，目前针对PEDV国内学者也进行了大量的研究，建立了相关的ELⅠSA诊断方法。陈茹等使用聚乙二醇（PEG）沉淀法分离纯化PEDV抗原，应用该抗原包被，建立了Dot-ELⅠSA方法检测PEDV抗体。研究结果表明该法检测PEDV抗体敏感、特异、重复性好；姜艳平等以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原，经过一系列条件的优化，建立了PEDV间接ELⅠSA抗体检测方法。李一经等应用杂交瘤技术制备的2株PEDV单克隆抗体，建立了检测PEDV的双抗体夹心ELⅠSA方法。

2.2 胶体金检测技术

胶体金技术是近年来应用较多的快速检测技术，目前已有很多商品化的产品，该方法具备快捷、简单、适用的优点，特别适合在基层使用。张利勃等将体外表达的PEDV的M蛋白抗原和自制的抗SPA多抗血清包被NC膜，分别作为检测线和质控线，成功制备了可检测PEDV血清抗体的快速诊断试纸条。研究表明该检测试纸条与ELⅠSA敏感性相近，检测了75份临床样本阳性样品符合率达96%。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．04.004