李金芳，马雪红，宋百灵,，李新霞,3，陈　坚

(1新疆医科大学药学院，乌鲁木齐　830011；2新疆埃乐欣药业有限公司， 乌鲁木齐　830013；3新疆医科大学中心实验室， 乌鲁木齐　830011)

HPLC法测定大鼠血液中H2S的含量

李金芳1，马雪红1，宋百灵1,2，李新霞1,3，陈坚2

(1新疆医科大学药学院，乌鲁木齐830011；2新疆埃乐欣药业有限公司， 乌鲁木齐830013；3新疆医科大学中心实验室， 乌鲁木齐830011)

摘要：目的建立测定大鼠血液中H2S含量的高效液相色谱法(HPLC法)。方法采用HPLC法，以乙腈-0.3%三乙胺=31∶69(磷酸调pH=2.07)为流动相，检测波长为664 nm。将大蒜辣素(Allicin)加入大鼠血细胞中，37℃孵育10 min后，测定Allicin进入血细胞后释放的H2S含量。结果HPLC法专属性符合要求，H2S的线性范围为0.8~80 μmol/L，定量限和检测限分别为0.8 μmol/L和0.4 μmol/L。将大蒜辣素加入大鼠血细胞中孵育后有H2S产生，测得大蒜辣素产生的H2S含量为3.23 μmol/L。结论HPLC法可用于生物样品中H2S的含量测定，检测限满足内源性H2S测定要求。H2S是大蒜辣素在血细胞中孵育后的产物，大蒜辣素有望成为H2S的供体。

关键词：大蒜辣素； HPLC； 亚甲蓝法； H2S； 前药

20世纪90年代，H2S被证实是存在于体内的第3种气体信号分子[1]。H2S对神经系统有调节作用，还可舒张血管平滑肌，降低血压[2]。研究表明内源性H2S在脑内的浓度为50~160 μmol/L[3]，在大鼠的血清浓度约为46 μmol/L[4]，在人血液中的H2S浓度为10~100 μmol/L[5]。内源性H2S可通过酶途径和非酶途径产生。酶途径有3个转硫化作用关键酶，即胱硫醚-β-合成酶(tathionine-p-synthase，CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(stathionine-ylyase，CSE)和巯基丙酮酸转硫酶(sulphurtransferase，MPST)。其中CBS分布于心脑血管和肾脏；CSE分布于心脑血管和肝脏；MPST分布于线粒体和细胞质中。在哺乳动物细胞内，3种酶以半胱氨酸等含硫化合物为底物产生H2S[6-7]。……