胡萍　徐晓栋　任琦

·论著·

HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素的含量

胡萍徐晓栋任琦

目的 探讨HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量。方法 盐酸多西环素含量测定应用HPLC法，采用AlltimaC 18柱，草酸铵溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氢二铵溶液0.2mol/L（65：30：5）为流动相，监测波长为280 mm。结果 48～489 mg/L，线性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均为98.35%，RSD 为1.30%。结论 HPLC法操作简单，检测结果准确，可作为质量标准检测方法。

盐酸多西环素；HPLC法；含量；高效液相色谱

盐酸多西环素是一种半合成四环素，具有抗菌活性以及抑制胶原酶作用，是治疗牙周病较为有效的药物［1-2］。牙周病主要是因菌斑微生物所导致感染性疾病，长期给予抗生素，易产生耐药菌株或者是菌群失调。报道显示［3-5］，生物降解盐酸多西环素，牙周袋注射，能控制龈下菌斑，对牙周致病菌产生抑制，缓释时间能达到7 d。本文主要探讨HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量，具体如下。

1　仪器与试剂

1.1HPLC法

高效液相色谱分析法（HPLC法）将经典液相色谱作为基础，以高压下液体为流动相色谱过程。固定相所用固定相粒度小，为5～10 μm，且传质快、柱效高。

1.2仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-10AT），AlltimaC 18柱，紫外检测器（SPD-10AV）；电子天平、pH计、真空抽滤泵、超声仪、干燥烘箱、恒温水浴锅、N 2000色谱工作站。

1.3试剂

中国药品生物制品检定所提供美他环素、土霉素、β-多西环素、多西环素，盐酸多西环素缓释药线、自制重蒸水，其他试剂均分析纯。

2　方法

2.1色谱

填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，AlltimaC 18柱为4.6 mm×250 mm，5 μm；pH值调节使用氨试液，直至（8.1±2.2）；草酸铵溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氢二铵溶液0.2 mol/L（65∶30∶5）为流动相；流速为1.0 ml/min，检测波长为280 mm，柱温为35℃。

2.2制备对照品溶液与供试品溶液

取适量的多西环素，加盐酸溶液0.01 mol/L，制成每1 ml中含200 μg多西环素对照组品溶液。取100 mg盐酸多西环素缓释药线，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀释使用盐酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，摇晃均匀，取5.0 ml，并流动相稀释定容于量瓶（10 ml）获取供试品溶液。

2.3系统适应性

称取8 mg美他环素、土霉素、β-多西环素、多西环素，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀释使用盐酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，并吸取1 ml，放置于棕色量瓶（10 ml），稀释使用盐酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，制成混合溶液（约含0.08 mg/L），吸取20 μl进样。理论塔板数：β-多西环素＞1.5、多西环素＞1.5、多西环素色谱峰＞1 500。

2.4辅料干扰

盐酸多西环素缓释药线（自制），阴性样品溶液制备参照供试品溶液制备方法，取20 μl，根据色谱条件，将其注入色谱仪，多西环素对照品对应位置敷料无色谱峰，提示不会干扰主药含量测定。

3　结果

3.1绘制标准曲线

取24.5 mg多西环素对照品溶液，放置于棕色量瓶（50 ml），溶解稀释使用盐酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，对照品储备液浓度为0.49 mg/ml，分别取储备液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml，稀释使用10 ml甲醇，20 μg进样，对峰面积进行测定，浓度线性回归，获取回归方程（A=43 765 C+562 000，r=0.999 6），结果显示48～489 mg/L，线性良好。

3.2精密度

取200 mg/L多西环素对照品溶液，吸取20 μl，参照色谱，并注入色谱仪，持续6次进样，对峰面积进行测定，峰面积平均为12 610 111 RSD%=0.70%，提示精密度好。

3.3样品稳定性

取批号20 100 610、20 100 611、20 100 612制成供试品溶液，放置于棕色瓶，于室温储存，于1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行测定，RSD为1.00%、0.97%、1.13%，提示避光条件下，样品24 h内可保持稳定。

3.4回收率

取6份5 mg盐酸多西环素，分别放置于棕色量瓶（10 ml），将按照比例称定基质加入，溶解稀释使用甲醇，直至刻度，摇晃均匀后过滤。量取5 ml续滤液，防治于量瓶（10 ml），加流动相，稀释直至刻度，摇晃均匀，取20 μl盐酸多西环素对照品溶液、供试品溶液，根据色谱，注入液相色谱仪，对峰面积进行测定，得出回收率，均回收，回收率平均为98.35%，RSD为1.30%。

3.5样品

取适量盐酸多西环素缓释药线，样品溶液制备根据制备供试品溶液方法，去20 μl，按照色谱，注入色谱仪，对峰面积进行测定，并计算其含量，20 100 610、20 100 611、20 100 612样品含量分别为9.84%、10.30%、9.93%。

4　讨论

在测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量中，紫外分光光度法是即为常用的检测方法，虽然简单易行、成本低，但其专属性较差。高效液相色谱分析法（HPLC法）灵敏度高，检测结果准确可靠。出峰时间大约为10 min，15 min左右可完成1次测定。盐酸多西环素含量测定需要避光操作，预防分解，且有多个有关物质，HPLC法能将各种物质有效分离［6-8］。样品溶液、对照品均需要现配先用，注意操作速度，防止盐酸多西环素分解，本文研究发现，48m～489 mg/L，线性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均为98.35%，RSD为1.30%。提示提示避光条件下，HPLC法，在样品24 h内可保持稳定，可用于盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量测定。

总之，采取HPLC法测定盐酸多西环素缓释药线中盐酸多西环素含量，结果准确，可作为质量控制检测方法。

［1］魏荣卿，李晴，刘晓宁，等.多西环素及有关物质测定的HPLC方法研究［J］.中国抗生素杂志，2010，35（12）：951-955.

［2］杨美燕，刘庆晓，单利，等.多西环素牙周缓释原位凝胶的制备和局部刺激性研究［J］.中国药学杂志，2016，47（16）：1313-1317.

［3］陆莹梅，李建林，吕华林.多西环素药理学及新型制剂的研究进展［J］.湖南畜牧兽医，2015，36（6）：8-10.

［4］王丽瑶，王永禄，李学明，等.盐酸多西环素缓释片体内外相关性研究［J］.中国抗生素杂志，2013，38（10）：765-768.

［5］符华林，张莉，张伟.盐酸多西环素微囊制备及其在家兔体内的药动学研究［J］.畜牧兽医学报，2011，42（10）：1438-1444.

［6］王笑琴，戴艳，唐建华，等.盐酸多西环素缓释片的研制及释放度考察［J］.中国药业，2013，22（18）：67-68.

［7］袁耀佐，张玫，钱文，等.HPLC法测定盐酸多西环素及其制剂含量和有关物质［J］.药物分析杂志，2010，30（12）：2304-2310.

［8］蔡正东.HPLC法测定盐酸多西环素软胶囊中盐酸多西环素及有关物质［J］.北方药学，2013，10（1）：14-16.

The Content of Doxycycline Hydrochloride in Doxycycline Hydrochloride Sustained-Release Thread by HPLC

HU Ping XU Xiaodong REN Qi Pharmacy Department，Xinyang Vocational and Technical Colleges Affiliated Hospital，Xinyang He'nan 464000，China

Objective To explore the determination of doxycycline hydrochloride doxycycline hydrochloride sustained-release thread HPLC.Methods Doxycycline hydrochloride content determination by HPLC，using AlltimaC 18 column and 0.05 mol / L ammonium oxalate solution：dimethyl formamide：diammonium hydrogen phosphate solution 0.2 mol / L（65：30：5）as mobile phase，wavelength monitoring for 280 mm.Results 48～489 mg/L，linearity was good，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，the average recovery rate was 98.35%，RSD was 1.30%.Conclusion HPLC method is simple and accurate，and can be used as a quality standard for testing.

Doxycycline hydrochloride，HPLC method，Content，High performance liquid chromatography

R927

A

1674-9308（2016）23-0134-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.23.084

信阳职业技术学院附属医院药剂科，河南 信阳464000