李建达，于 江，张玉玉，任素芳，陈 蕾，郭立辉，孙文博，陈 智，王 淞1，，刘俊珍，杜以军，李 俊，杨灵芝，王金宝1，＊，吴家强＊

（1.青岛农业大学动物科技学院，青岛266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，济南250100；3.山东滨州沃华生物工程有限公司，滨州256600）

猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

李建达1，2§，于 江2§，张玉玉2，任素芳2，陈 蕾2，郭立辉2，孙文博2，陈 智2，王 淞1，2，刘俊珍2，杜以军2，李 俊2，杨灵芝3，王金宝1，2＊，吴家强2＊

（1.青岛农业大学动物科技学院，青岛266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，济南250100；3.山东滨州沃华生物工程有限公司，滨州256600）

摘 要：试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计CPS2J基因特异性引物，建立猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法的标准曲线为y＝－3.073x＋36.87，r＝0.995，熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示，该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×101拷贝／μL，是普通PCR的10倍；特异性试验显示，对猪链球菌2型具有良好的特异性，能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌；重复性试验变异系数为0.37%～0.63%，均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规PCR方法和细菌分离的方法。以上结果表明，本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好，有利于对猪链球菌2型的快速检测。

关键词：猪链球菌2型；实时荧光定量PCR；敏感性；特异性；重复性

猪链球菌（Streptococcussuis）是一种危害严重的人兽共患病病原菌，临床上以引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症和突发死亡等症状为主。至今，已鉴定出35个血清型（1～34型及1／2型）［1］。引起猪发病的主要血清型是1、2、7、9型，其中2型不仅致病性强，而且流行较为广泛。……