尚芳芳，赵 辉，王 强，种道臣

液基薄层细胞检测联合细胞块技术诊断胸腹水肿瘤

尚芳芳，赵 辉，王 强，种道臣

目的探讨液基薄层细胞学与石蜡包埋细胞块技术在胸腹水肿瘤诊断中的联合应用。方法对所有临床送检的胸腹水标本进行液基薄层细胞学检查，同时将胸腹水沉积物制成石蜡包埋细胞块，进行免疫组织化学染色，判断细胞的良恶性，确定肿瘤细胞类型和组织起源。结果检测476例胸腹水患者，单纯液基薄层细胞学检出良性病变310例，恶性90例，继而进行细胞块的免疫组织化学染色，确定良性365例，恶性111例，有统计学差异（P＜0．01）；确定分型104例，与液基薄层细胞学检查（确定分型77例）比较，无统计学差异（P＞0．05）；确定肿瘤细胞来源92例，与液基薄层细胞学检查（确定来源0例）比较，有统计学差异（P＜0．01）。结论液基薄层细胞学技术与石蜡包埋细胞块技术联合应用对判断胸腹水的肿瘤细胞良恶性及组织来源具有重要价值。

液基薄层细胞检测；胸腔积液；腹水；细胞块；免疫组化染色

胸腹水（胸腔积液和腹水）是胸腹腔脏器病变常见的临床表现，其产生机制较为复杂。胸腹水脱落细胞学检查由于对患者损伤较小，操作方法简单，检查周期较短，已成为诊断肿瘤的重要方法。液基薄层细胞检测早已广泛用于胸腹水的检测［1］，目前沉淀包埋石蜡切片法［2］及细胞块免疫组织化学染色方法的应用对于胸腹水脱落细胞学检查准确率有了很大提高。笔者所在医院病理科自2010年9月以来，对476例胸腹水患者开展了细胞块的制作及免疫组织化学染色技术，探讨液基薄层细胞检测及细胞块的免疫组化染色技术对恶性肿瘤细胞的检出情况及确定肿瘤细胞的分型及来源情况，报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料收集2010年9月—2014年5月解放军第四〇一医院临床各科室送检的胸腹水标本476例，其中胸腔积液368例，腹水108例。年龄21～99岁。均做了离心沉渣包埋切片并进行免疫组织化学染色。

1．2 试剂所用一抗体包括CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68、ER 和MaxVision检测试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1．3 方法

1．3．1 液基细胞学检查 取新鲜胸腹水置于2个10 ml离心管内，每管8 ml，2000 r／min，离心10～15 min，弃去上清液，保留管底有用细胞，再加入大约细胞团体积3倍的细胞基液。在漩涡混匀器上混匀10 s后，用移液器吸取15 ml在脱脂载玻片上涂片，涂片面积直径为1．5 cm。涂片干燥后用95%乙醇固定30 min，HE染色，中性树胶封固。

1．3．2 细胞块制作方法 取胸腹水置于50 ml离心管内，以2000 r／min的速度离心10 min，弃去上清液，留沉淀物在试管内，加入95%乙醇，边加边摇动，使沉淀物分散，再次放入离心机内2000 r／min离心10 min倒出上清液，然后用药匙取出沉渣用擦镜纸包裹［3］，放入包埋盒内，经LEICA ASP300S全自动组织脱水机脱水、透明、浸蜡。按常规组织标本的程序进行包埋、切片，HE染色，中性树胶封固。

1.3．3 免疫组化染色步骤 常规脱蜡水洗，加3% H2O2室温孵育10 min，蒸馏水洗；根据所应用一抗的特殊需要，加0．05%胰酶在37℃条件下消化10 min或枸橼酸缓冲液经抗原修复，PBS冲洗；10%正常羊血清封闭，室温孵育10 min，不冲洗；滴加一抗工作液CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68等覆盖组织面，4℃冰箱过夜；PBS冲洗，二抗37℃孵育30 min；PBS冲洗，DAB显色，镜下控制；复染细胞核、分化、脱水、透明、封固。

1.3.4 阳性结果的判断标准 在普通光镜下观察免疫组化染色结果，以10%以上的靶细胞（异型细胞或癌细胞）出现定位清晰的棕褐色或黄色颗粒为阳性表达，完全不着色为阴性表达［4］。

1.4 统计学方法应用SPSS17．0统计软件，组间比较采用Pearson卡方检验。

2 结果

476例患者送检标本中，胸腔积液368例，腹水108例，经液基薄层细胞学检查，明确诊断良性病变310例，查见恶性肿瘤细胞90例，不能确定良恶性诊断的胸腹水病例76例。进一步进行细胞块的免疫组织化学染色，确定良性胸腹水365例，恶性胸腹水111例（图1）。两种方法进行比较，细胞块的免疫组织化学染色检出情况优于液基薄层细胞学检查，差异有统计学意义（χ2＝15．40，P＜0．01，表1）。

表1 两种方法对于476例胸腹水恶性肿瘤细胞检出情况

图1 标本液基薄层细胞学检查

476例胸腹水经液基薄层细胞学检查，确定恶性肿瘤细胞90例，其中确定分型77例 （腺癌73例，小细胞癌4例），均未能确定恶性肿瘤细胞来源。继而进行细胞块的免疫组织化学染色，确定恶性肿瘤细胞111例，其中确定分型104例（腺癌99例，小细胞癌4例，鳞癌1例），确定恶性肿瘤细胞来源92例（肺来源的腺癌47例、肺来源小细胞癌3例、肺来源鳞癌1例，胃肠道来源的腺癌30例，卵巢来源的腺癌9例，乳腺来源的腺癌2例）（图2）。

两种方法对于确定分型的比较，差异无统计学意义（χ2＝3．67，P＞0．05）；对于确定恶性肿瘤细胞来源的比较，差异有统计学意义（χ2＝137．56，P＜0．01，见表2），细胞块的免疫组化染色技术优于液基薄层细胞学检查。

表2 两种方法对于确定分型和来源的比较

3 讨 论

液基薄层细胞检查技术在胸腹水细胞制作方面已很成熟［5］。细胞涂片薄层，细胞收集率高，背景清晰，容易阅片。对于数量较多、较典型的肿瘤细胞诊断较明确。但对于某些肿瘤细胞较少，没有临床病史依据或者对可疑癌和高分化癌细胞、反应性间皮细胞和间皮瘤等较难鉴别诊断的疑难病例较难确诊。虽然液基薄层细胞涂片也可以行免疫细胞化学染色，但具有细胞阳性区域不易确定，非特异性着色较多，所能标记的抗体种类、数目有限等缺点。

图2 同一细胞块的免疫组化染色

细胞块技术具有组织学特点，细胞结构清晰，可提高阳性率；切片可以复制，资料容易保存，并可进行多项检查［6］。应用细胞块进行免疫组织化学染色阳性部位明显，色彩鲜艳，定位准确，背景清晰，具有很高的可靠性及可重复性，对于鉴别良恶性胸腹水及判断恶性肿瘤细胞来源具有重大的科学性及实用性［7］。笔者采用CK7、CK20、TTF－1、NapasinA、villin、CDX2、CEA、MC、CR、CD68等抗体进行胸腹水细胞块免疫组化染色，结果发现上述10种抗体对肺、胃肠、胰腺、卵巢、乳腺等部位的组织起源的确诊具有重要意义。

本研究结果表明，与液基薄层细胞检查比较，继而进行细胞块免疫组织化学技术对恶性肿瘤的确诊率和可疑癌所占比例，差异有显著性（P＜0．01）。液基薄层细胞检查与细胞块的免疫组织化学技术联合应用可明显提高癌确诊率和降低可疑癌的诊断率，且能确定大部分肿瘤细胞的类型和来源，更能为临床提供可靠诊断依据。

总之，对常规胸腹水脱落细胞学诊断有疑问的病例，进行细胞块及免疫组织化学检测具有重要意义。将两种方法相结合不仅可以在疑难胸腔积液和腹水鉴别诊断中起关键作用，还可鉴别恶性肿瘤细胞的类型和来源，为临床的明确病因及进一步治疗提供了很重要的依据。

［1］Laucirica R，Bentz JS，Souers RJ，et al．Do liquidbased preparations of urinary cytology perform differently than classically prepared cases？observations from the college of American pathologists interlaboratory comparison program in non-gynecologic cytology［J］．Archi Pathol Laborat Med，2010，134（91）：19－22．

［2］Patricia AF，Aylin S，Keith B，et al．Comparison of three commonly used cytologic preparation in effusion immunocytochemistry［J］．Diagn Cytooathol，2002，26（1）：61－66．

［3］曹跃华，杨 敏，陈隆文，等．细胞病理学诊断图谱及实验技术［M］．北京：北京科学技术出版社，2009：410－412．

［4］毛瑛玉，杨 敏，刘冬戈，等．细胞块切片免疫细胞化学染色在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用［J］．中华病理学杂志，2009，38（8）：547－550．

［5］Sioutopoulou DO，Kampas LI，Gerasimidou D，et al．Diagnosis of metastatic tumors in cerebrospinal fluid samples using thin layer cytology［J］．Acta Cytol，2008，52（3）：304－308．

［6］Nangia R，Sait SN，Block AW，et al．Trisomy 6 in basal cell carcinomas correlates with metastatic potential：a dual color fluorescence in situ hybridization study on paraffin sections［J］．Cancer，2001，91（10）：1927－1932．

［7］Sriram KB，Relan V，Clarke BE，et al．Diagnostic molecular biomarkers for malignant pleural effusions［J］．Future Oncol，2011，7（7）：737－752．

［2015-10-19收稿，2015-11-17修回］

［本文编辑：吴 蓉］

Liquidbased thin－cytologic test combined with cell block sections technology for diagnosing hydrothorax and ascites tumor

SHANG Fang-fang，ZHAO Hui，WANG Qiang，et al.
The Pathology Department of the 401st Hospital，Qingdao，Shandong 266071，China

ObjectiveTo evaluate the combined application of routine liquidbased thin－cytologic test and cell block sections in hydrothorax and ascites tumor cytodiagnosis．MethodsImmunohistochemical staining of cell block paraffin embedding cell block were carried out to determine the characteristics of tumor cells，as well their type and origin．Routine liquidbased thin－cytologic test was alone performed as a control．ResultsTotally 111 of 476 patients were diagnosed malignant，and 365 benign through paraffin embedding cell block and immunohistochemical staining，which was significantly better than alone routine liquidbased thin－cytologic test detection（310 benign lesions and 90 malignant tumors）（P＜0．01）；No statistically significant difference were found in tunor classification（104 cases）compared with TCT（77 cases）（P＞0．05）；Significantly difference was found in tumor origin（92 cases）compared with TCT（0 case）（P＜0．01）．ConclusionThe combined application of routine liquidbased thin－cytologic test and cell block sections from hydrothorax and ascites can provide valuable methods of tumor diagnosis and to distinguish the origins of tumor cell tissues．

Liquidbased thin－cytologic test；Pleuraleffusion；Ascites；Cellblock；Immunohistochemical staining

R730.43

A

10.14172/j.issn1671-4008.2016.04.006

266071山东青岛，解放军401医院病理科（尚芳芳，赵辉，王强，种道臣）