郭 敏郑中华

沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

郭 敏1郑中华2

目的 探究沉默干扰素诱导蛋白16（IFI16）对人主动脉外膜成纤维细胞（HAAFs）凋亡的影响。方法 检测HAAFs凋亡、IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）蛋白表达。结果 基因沉默组IFI16低于另两组（P＜0．05），基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组（P＜0．05），阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率。

干扰素诱导蛋白16；人主动脉外膜成纤维细胞；凋亡

人主动脉外膜成纤维细胞（HAAFs）增殖和凋亡的失衡是血管重构的细胞学基础，其增殖与迁移过程广泛参与动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的发生与发展［1］。本次研究IFI16小干扰核糖核酸转染使IFI16基因沉默，抑制IFI16的表达，探究沉默IFI16对HAAFs凋亡的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

原代HAAFs、成纤维细胞培养基、成纤维细胞生长因子、转染试剂、IFI16小干扰核糖核酸、对照的小干扰核糖核酸、IFI16抗体、ERK1/2抗体、p-ERK1/2抗体。

1.2 方法

培养HAAFs，取其3～5代细胞，将实验细胞分为IFI16小干扰核糖核酸（基因沉默组）、对照的小干扰核糖核酸（阴性对照组）及未经干扰的HAAFs（空白组）。六孔板中取生长状态较好的HAAFs，使用不含双抗的成纤维完全培养基培养，细胞密度达30%～50%后进行小干扰核糖核酸转染。添加小干扰核糖核酸转染复合物干预6 h，继续培养，使用对照的小干扰核糖核酸检测转染效率。提取细胞蛋白，检测蛋白浓度，加入十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白上样缓冲液，100℃加热5 min使变性。……