周昌钻，郭航远，，孟立平，季政

（1.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；2.绍兴市人民医院（浙江大学绍兴医院） 心内科，浙江 绍兴 312000）

・论 著・

两种原代培养方法对血管平滑肌细胞收缩表型的影响

周昌钻1，郭航远1，2，孟立平1，季政2

（1.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；2.绍兴市人民医院（浙江大学绍兴医院） 心内科，浙江 绍兴 312000）

目的：探究胶原酶消化法和植块法培养原代血管平滑肌细胞（VSMCs）对细胞收缩表型影响的特点。方法：使用I I型胶原酶消化法和植块法分别离体培养原代VSMCs，并获取第1代、第2代、第4代、第8代、第12代VSMCs，Western blot检测不同代数表型标志蛋白α平滑肌肌动蛋白（SMA-α）、调宁蛋白（calponin）和骨桥蛋白（OPN）表达情况；随后检测不同培养方法间表型标志蛋白表达差异，并用划痕实验和MTT实验检测迁移、增殖水平，免疫荧光检测SMA-α胞内表达。结果：消化法最初可获得明显优于植块法的VSMCs收缩表型，表现为SMA-α和calponin高表达，OPN较低表达，增殖、迁移能力相对较弱。培养至第8代后，2种方法的细胞都发生显著的表型改变，增殖、迁移能力增强且消化法细胞呈现更强的去分化表型趋势。结论：I I型胶原酶消化法可快速获得良好收缩表型的VSMCs，在第4代前具有优于植块法的收缩表型。[关键词]血管平滑肌细胞；表型；细胞去分化；细胞分离；原代培养

正常血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）保持稳定的收缩表型，但仍保持了重塑的潜力，在环境刺激下可发生表型转化，是动脉粥样硬化、高血压、术后再狭窄等血管性疾病的病理基础[1-2]。VSMCs去分……