戴建华，高 崧

（1.扬州大学兽医学院，扬州225403；2.江苏农牧科技职业学院，泰州225300）

·综述·

新城疫病毒反向遗传技术的研究进展

戴建华1，2，高 崧1

（1.扬州大学兽医学院，扬州225403；2.江苏农牧科技职业学院，泰州225300）

新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）在分类上属于副粘病毒科、副粘病毒属（Avulavirus），是单股、负链、不分节段的RNA病毒。反向遗传技术是指从生物遗传物质DNA或RNA入手，通过对遗传物质进行加工、修饰以及替换等，来研究基因突变后产生的生物学特性变化，从而确定生物体基因组的结构与功能以及这些突变可能对生物学特性的影响。目前该技术已经成为病毒学领域中研究基因功能的最有效方法。本文简述了NDV反向遗传操作系统的构建过程以及利用该技术在NDV研究中的最新成果。

新城疫病毒；反向遗传；毒力；病毒载体

1　病毒概况

新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）在分类上属于副粘病毒科（Paramyxoviridae）副粘病毒属（Avulavirus）中的成员，是单股、负链、不分节段的RNA病毒［1］。目前NDV的核苷酸总数有3种长度，分别为15 186、15 192、15 198 nt。NDV的基因组结构为3'-NP-P-M-F-HN-L- 5'，共编码6种结构蛋白，即核衣壳蛋白（nucleoprotein，NP）、磷蛋白（phosphoprotein，P）、基质蛋白（matrix protein， M）、融合蛋白（fusion protein，F）、血凝素-神经氨酸酶（hemagglutinin-neuraminidase protein， HN）和RNA聚合酶蛋白（RNA-dependentRNA polymerase protein，L）。此外NDV的P基因转录过程中可在第484特定位置插入非模板G碱基发生RNA编辑现象，产生V和W两种非结构蛋白，位于囊膜上的F蛋白和HN蛋白是主要的保护性抗原［2，3］。

2　新城疫病毒反向遗传技术

1999年Romer-Oberdorfer等［4］和Peeters等［5］所在的实验室几乎同时发表了新城疫病毒拯救成功的研究报道。到目前为止，许多不同基因型、不同毒力的毒株已被成功拯救。NDV的反向遗传技术主要包括病毒基因组全长cDNA克隆的构建、NP、P和L基因表达质粒的构建和鉴定以及进行质粒共转染三部分。……