鲍悦，姜威，刘冬，孙佳明，张辉

(长春中医药大学 中医药与生物工程研发中心，吉林 长春 130117)

中国林蛙的药理研究进展△

鲍悦，姜威，刘冬，孙佳明，张辉*

(长春中医药大学 中医药与生物工程研发中心，吉林 长春 130117)

中国林蛙是集药用、滋补保健、食用为一体的蛙种，其含有丰富的活性成分，已成为食品、医药、日化等轻工业的重要原料。本文对近年来国内期刊有关中国林蛙研究的文献进行检索和归纳分析，对哈蟆油、林蛙卵、林蛙头、林蛙皮的药理研究进行综述。中国林蛙具有抗氧化、改善学习记忆、抗疲劳、止咳平喘、降血脂、抗肿瘤、抗惊厥以及基因调控等药理作用，并有学者以甘氨酸乙酯盐酸盐为原料，人工合成海因和5,5二甲基海因。中国林蛙药理作用具有多样性，该综述对其日后的开发和利用有着重要意义，并为中国林蛙的进一步的研究提供参考。

中国林蛙；药理研究

中国林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)是我国著名的集药用、食用、保健于一身的珍贵蛙种，栖息在东北的山林沼泽中，沐春风而生，伴冬雪而眠，生性耐寒，故又称雪蛙。中国林蛙含有丰富的活性成分，已成为食品、医药、日化等轻工业重要的原料，特别是哈蟆油。哈蟆油是中国林蛙雌蛙的输卵管经采制干燥而得。哈蟆油始载于《本草纲目》，其中将其列为上品。具有补肾益精、养阴润肺的功能，更因其稀少而珍贵，富有“滋补软黄金”的美誉。在我国清代哈蟆油就成为皇宫贵族必备的滋补品。现代医学表明，哈蟆油临床上常用于病后体弱、神疲乏力、心悸失眠、盗汗、痨嗽咳血的治疗。

1 哈蟆油的药理研究

1.1 抗氧化

姚晖[1]通过对其课题组前期研究和近20年哈蟆油相关文献的分析发现，哈蟆油延缓衰老的作用机制主要与抗活性氧自由基(ROS)作用相关。张梅[2]选用雄性小鼠建立过氧化损伤模型，灌胃给药30 d后发现，哈蟆油可以显著降低小鼠血中丙二醛的含量，增加肝脏中的过氧化脂质、氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Ps)的含量。蓝晶晶[3]探讨出最佳酶解工艺，从哈蟆油中酶解提取抗氧化肽，测得该抗氧化肽清除羟自由基、超氧阴离子、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的IC50分别为27.35、19.17、11.68 mg·mL-1，说明哈蟆油有显著的抗自由基氧化活性。张馨月[4]利用流式细胞仪测定哈蟆油中水溶性蛋白对过氧化氢(H2O2)氧化损伤Hela细胞的保护作用，研究发现，该保护作用与哈蟆油中水溶性蛋白抗氧化肽浓度呈正相关。

1.2 改善学习记忆力

高桂华[5]通过建立衰老模型对哈蟆油进行药理作用检测，发现哈蟆油及提取物均能提高衰老模型小鼠学习记忆能力及海马Na+-K+-ATP酶活性，减少海马神经元的损害和变性。马丹丹[6]应用同样的建模方法，发现年老组大鼠海马锥体细胞具有排列疏松紊乱、层次欠清晰、细胞脱失明显等特点。给予年老组不同剂量哈蟆油，大鼠海马神经元脱失现象较年老组有所改善，细胞层次较分明，形态较完整，尼氏体形态较正常，数量较年老组明显增多。说明哈蟆油在一定程度上具有保护海马神经元的作用，从而改善学习记忆力。

1.3 抗疲劳

现代医学表明，疲劳可分为生理性疲劳和运动型疲劳。杨靖[7]发现，当哈蟆油粗多糖剂量为100 mg·kg-1时，小鼠负重游泳实验效果最佳，时间延长为71.9%，说明蛤蟆油能显著提高小鼠抗疲劳能力。张梅等[8]研究发现，给予实验组小鼠哈蟆油30 d，可以延长负重游泳的时间，增加肝糖原含量，减少血乳酸曲线下面积。表明哈蟆油可以提高机体对运动负荷的适应能力，延缓疲劳的产生或加速疲劳的消除。张宏宇[9]以哈蟆油为原料提取、分离、纯化，得到一种糖蛋白ROGP-II，检测该糖蛋白各项药理指标，得到与张梅相同的研究结果，并发现哈蟆油还可以抑制血清尿素氮升高。

1.4 止咳平喘

在徐丽琴[10]文章中介绍，早在1997年刘玉兰等的研究就表明，哈蟆油及其甲醇、石油醚提取物均能明显延长二氧化硫(SO2)及浓氨水致小鼠引咳的潜伏期，减少咳嗽次数，使小鼠酚红排出量及大鼠痰液的排出量增加，说明哈蟆油具有明显的镇咳祛痰作用。王永生[11]研究发现，哈蟆油的乙醇提取部分也具有很好的镇咳活性。

1.5 调节免疫

高燕玲[12]研究发现，哈蟆油能明显增加小鼠血清中溶血素含量，并具有刺激B细胞分化增殖，转变为浆细胞的功能；提高假体内的抗体水平，增强体液免疫功能等药理活性。车宇飞[13]通过淋巴细胞转化实验和迟发性过敏反应实验检测小鼠T细胞免疫功能，结果发现，哈蟆油多肽口服液对小鼠细胞免疫功能有一定的促进作用。对小鼠的碳廓清指数和巨噬细胞的吞噬指数以及吞噬率进行检测，结果表明，蛤蟆油同时具有对小鼠的非特异性免疫有促进作用。许洪亮等[14]发现，经口给予小鼠不同剂量的0.5%哈蟆油匀浆30 d后，蛤蟆油对小鼠的自然杀伤细胞(NK细胞)并没有影响，但能增强小鼠迟发型变态反应。

1.6 抗肿瘤

杨靖[7]选用卵巢癌细胞对中国林蛙粗多糖进行抗肿瘤活性筛选，在该实验条件下，哈蟆油粗多糖没有明显的抗肿瘤活性。赵丹玉等[15]从中国林蛙卵中提取得到核糖核酸酶，采用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT)检测该核糖核酸酶对鼠S180肿瘤细胞株生长以及对淋巴细胞转化的影响，结果表明，其对鼠S180肿瘤细胞株生长和淋巴细胞转化具有较强的抑制作用，并呈现剂量依赖性。

1.7 降血脂

彭飞等[16]研究表明，CO2超临界萃取的哈蟆油在高剂量的条件下(8 g·kg-1)，给药前后降低甘油三酯(TG)的程度为54%，降低胆固醇(TC)的程度为51%，对高密度脂蛋白无显著影响。张梅[2]发现，哈蟆油及酶解物均能降低TC、TG含量，且与高脂对照组比较差异有统计学意义。说明哈蟆油及酶解物可以降低由于高脂膳食所致的血清总胆固醇和甘油三酯含量。这些都说明哈蟆油具有辅助降血脂的保健功能。

1.8 基因调控的作用

张圆圆等[17]总结发现，哈蟆油能使小鼠肝组织中抗氧化基因Gpx4表达量明显增加，并且对老年鼠的影响大于青年鼠。说明中国林蛙油对老年鼠的抗氧化、抗衰老作用明显。李毅喆[18]研究发现，中国林蛙卵油能调控ApoE、LDL-R、ABCA1基因在降血脂过程中的表达，这些与血脂相关的基因在中国林蛙卵油的调节下可以充分发挥其降血脂的作用。

2 中国林蛙头的药理研究

孙兴权等[19]以林蛙头为原料，提取分离得到林蛙多糖(TCPS)，经抗凝实验表明，该林蛙多糖具有较好的抗凝血作用，但有关抗凝的作用机制尚不明确。徐丽琴[10]在孙兴权的研究基础上得到了中国林蛙头提取物的作用机制，是通过抑制血浆中的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ的活性来达到抗凝血作用。其抗凝血的活性大概是肝素的二十分之一，同时用试管血液凝固方法测定了其抗凝血活性的效价为5.2 U。

3 中国林蛙皮的药理研究

徐义刚[20]以大肠埃希氏菌等为检测菌种，进行中国林蛙皮肤活性肽的抑菌实验。结果发现，该小分子活性肽对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌具有一定的抗菌活性。姜丽丽[21]发现，从中国林蛙皮中提取出的生物活性肤组分Flll对小鼠5180胃肉瘤细胞有明显的抑制作用。李俊峰[22]对中国林蛙皮肤活性肽进行分离纯化，得到6个新多肽，其中3个为抑菌肽，2个为缓激肽。经抑菌实验发现，其中2个抑菌肽具有光谱抑菌性，另一个抑菌肽只对金黄色葡萄球菌有抑制作用。通过豚鼠离体回肠实验测定出其中2个缓激肽能使得豚鼠回肠明显收缩，且收缩强度与肽浓度成正相关，但另一种多肽无缓激肽作用。

4 中国林蛙卵的药理研究

彭飞[23]以士的宁为致惊剂，评价中国林蛙卵油抗惊厥活性的时效和量效关系。研究发现，给予动物中国林蛙卵30 min，其抗惊厥作用效果最好。王宇[24]从中国林蛙卵中提取纯化出抗癌活性蛋白，对小鼠S180胃肉瘤细胞有明显的抑制作用，并能显著诱导K562肿瘤细胞发生凋亡。邢燕[25]利用CO2萃取和超声波辅助乙醇提取两种方法提取中国林蛙卵中的雌激素，通过对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)等3种自由基的清除率进行测定，结果表明，中国林蛙卵雌激素具有抗氧化活性，随着样品浓度的增加，抗氧化活性也随之增加。

5 人工合成

张楠[26]从哈蟆油中提取、分离和纯化出了1-甲基海因，随后考察了1-甲基海因的止咳活性，发现其对氨水所致小鼠咳嗽有非常显著的抑制作用，止咳活性与氨茶碱持平，略低于可待因，同时能明显延长小鼠咳嗽潜伏期。因此，张楠以甘氨酸乙酯盐酸盐为原料，采用液相合成法筛选合成路线，得到目标产物海因和5，5-二甲基海因，收率为78%，其纯度可达到99%。

中国林蛙作为一种全身皆可入药的名贵动物药具有悠久的药用历史。随着现代科技的不断发展以及技术的不断创新，中国林蛙不仅仅有着重要的药用价值，并且在食品、日化等轻工业中占有着重要的地位。通过对近年来国内期刊有关中国林蛙研究的文献进行检索和归纳分析，笔者对哈蟆油、林蛙卵、林蛙头、林蛙皮以及与之相关的复方制剂的药理研究进行综述。目前已归纳总结出中国林蛙具有抗氧化、延缓衰老、提高学习记忆、耐缺氧抗疲劳、止咳平喘、降血脂、抗肿瘤、抗惊厥以及基因调控等重要药理作用，从哈蟆油中提取、分离和纯化出了具有止咳活性的1-甲基海因。综上所述中国林蛙的药理作用具有多样性，因此该综述可为中国林蛙日后的开发利用及深入研究提供参考。

[1] 姚晖.哈蟆油延缓衰老作用及机制研究[D].广州：南方医科大学，2010.

[2] 张梅.哈蟆油酶解物制备工艺及药理活性研究[D].长春：长春中医药大学，2011.

[3] 蓝晶晶.林蛙油抗氧化肽的制备及其抗氧化活性的研究[D].北京：北京林业大学，2012.

[4] 张馨月.林蛙油抗氧化肽的制备及其抗氧化活性研究[D].长春：吉林农业大学，2014.

[5] 高桂华.哈士蟆油提取物对小鼠学习记忆功能的影响及作用机制的初探[D].哈尔滨：东北林业大学，2003.

[6] 马丹丹.哈蟆油延缓衰老的作用及机制初探[D].广州：南方医科大学，2013.

[7] 杨靖.林蛙油粗多糖提取条件优化及其药理活性研究[D].长春：吉林农业大学，2011.

[8] 张梅，赵雨，杨士慧，等.哈蟆油抗疲劳药理活性研究[J].现代预防医学，2012，39(8)：1978-1979.

[9] 赵宏宇.长白山林蛙输卵管糖蛋白ROGP-Ⅱ的分离纯化及抗疲劳活性研究[D].长春：吉林农业大学，2013.

[10] 徐丽琴.中国林蛙蛙头提取物中抗凝血活性物质的研究[D].大连：辽宁师范大学，2006.

[11] 王永生.哈蟆油药效成分及其质量控制方法的研究[D].长春：吉林大学，2007.

[12] 高燕玲.甘肃产蛤膜油对小鼠免疫力和应激性能的影响[J].中药材，1996，19(2)：90-92.

[13] 车宇飞.林蛙油多肽口服液的免疫及毒理评价[D].长春：吉林大学，2014.

[14] 许洪亮，张贵君，渠磊，等.0.5%哈蟆油匀浆对NK细胞活性和细胞免疫功能影响实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2014，16(11)：33-35.

[15] 赵丹玉，侯长余，王艳杰，等.林蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤作用及对淋巴细胞转化的影响[J].中国生化药物杂志，2010，31(4)：228-230.

[16] 彭飞，徐峰，刘彬，等.中国林蛙卵油对高脂血症大鼠血脂的影响[J].广州医学院学报，2003，31(3)：57-59.

[17] 张圆圆，杜智恒，白秀娟.小鼠林蛙油灌胃后其肝组织中Gpx4基因的表达规律研究[J].黑龙江畜牧兽医，2012，5(9)：13-16.

[18] 李毅喆.中国林蛙卵油对高脂血症家兔相关基因的表达研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2013.

[19] 孙兴权，胡耀辉，付蕾，等.中国林蛙头中抗凝物质的分离纯化及抗凝活性研究[J].吉林农业大学学报，2000(03)：100-103.

[20] 徐义刚.中国林蛙皮肤活性肽分离提取的研究[D].哈尔滨：东北林业大学，2004.

[21] 姜丽丽.中国林蛙皮肤生物活性肽的分离纯化及其部分生物活性的研究[D].大连：辽宁师范大学，2006.

[22] 李俊峰.中国林蛙皮肤生物活性肽的分离纯化、结构鉴定及生物活性检测[D].大连：辽宁师范大学，2009.

[23] 彭飞.中国林蛙卵油的抗惊厥作用[D].沈阳：沈阳药科大学，2002.

[24] 王宇.中国林蛙蛙卵抗癌活性蛋白的研究[D].大连：辽宁师范大学，2005.

[25] 邢燕.长白山亚种林蛙卵中雌激素的提取与活性研究[D].长春：长春工业大学，2014.

[26] 张楠.海因及5，5-二甲基海因的合成及活性筛选研究[D].长春：吉林大学，2009.

AdvancesinPharmacologicalResearchofChineseForestFrog

BAOYue，JIANGWei，LIUDong，SUNJiaming，ZHANGHui*

(ChangchunUniversityofTraditionalChineseMedicine，TraditionalChinesemedicineandbiologicalengineeringresearchanddevelopmentcenter；JilinChangchun130117，China)

The Chinese forest frog is a kind of frog which is used in medicine，nourishing health care and food，it is rich in active ingredients and has become food，medicine，chemical and other light industry important raw materials.In this paper，the literatures which on the research of the Chinese forest frog in recent years are summarized and analyzed，and the oviductus ranae，spawn of the forest frog，head of the forest frog，skin of the forest frog are reviewed.The Chinese forest frog has antioxidant anti-aging，improving learning and memory，resisting hypoxia and fatigue，relieving cough and asthma，lowering blood lipid，antitumor，anti convulsion and gene regulation pharmacological effects and so on and according to the structure of effective components of oviductus ranae were synthesized.Therefore，the diversity of the Chinese forest frog's pharmacological actions.This review is of significance to the development and utilization of Chinese forest frog in the future and to provide a scientific basis for further research on the further research of Chinese forest frog.

Chinese forest frog；pharmacological research

2015-07-07)

国家中医药行业专项(2015468002-2)

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张辉，教授，研究方向：中药化学；Tel：(0431)86172080，E-mail：zhanghui-8080@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.031