人体正常组织和恶性肿瘤组织XB130蛋白表达

廖梦颖陈斌1刘坚1张为民1丁彦青

(南方医科大学南方医院病理学系，广东广州510515)

摘要〔〕目的分析XB130蛋白在人体肿瘤组织中的分布特点及相关性。方法应用免疫组化法和组织芯片技术检测XB130蛋白在人体比较常见的恶性肿瘤组织中的分布。结果XB130蛋白在15 种正常人组织中，即胃黏膜、肾皮质组织、甲状腺组织中高表达，在肺泡上皮、子宫内膜中未见XB130蛋白阳性表达，其余组织均为中-低表达。常见18种肿瘤组织及生殖系统肿瘤中，除子宫颈鳞状细胞癌XB130为阴性，其余肿瘤胰腺导管腺癌、前列腺腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌、乳腺导管原位癌、卵巢间变型无性细胞瘤等肿瘤细胞XB130 蛋白高表达；甲状腺乳头状癌、胃腺癌、结肠腺癌、直肠腺癌、肝细胞性肝癌、肾透明细胞型肾癌、肺鳞状上皮癌、肺腺癌、食管鳞状细胞癌、卵巢浆液性乳头状腺癌、卵巢囊腺癌等低表达。结论XB130蛋白在多种肿瘤组织中高表达，首次报道在前列腺癌中高表达，表明XB130可能在促进前列腺癌发生发展起到一定作用。

关键词〔〕XB130；免疫组化；组织芯片

中图分类号〔〕R39〔

基金项目：国家自然科学基金(81101822)

通讯作者：丁彦青(1950-)，男，硕士，博士生导师，教授，主要从事肿瘤病理研究。

1广州军区广州总医院

第一作者：廖梦颖(1987-)，女，硕士，医师，主要从事肿瘤病理研究。

产生肿瘤的大多原因是其多种基因表达失常，XB130是一种新型接头蛋白，位于染色体10q25.3，编码一种818个氨基酸组成的蛋白质，因为分子量大小是130 kD〔1〕。目前在甲状腺、胃癌、人肺上皮细胞、胰腺导管癌等组织和细胞中对XB130基因进行了初步分析〔2，3〕，本文旨在观察人体正常组织和常见恶性肿瘤组织中XB130的分布和表达及相关性。

1材料与方法

1.1标本广州军区广州总区院2002 年1月至2013 年1月手术切除的常见肿瘤组织蜡块标本，男57例，女28例；正常组织蜡块标本，男32例，女15 例；年龄60～83岁(平均71.5)岁。所有组织均用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋。

1.2组织芯片的构建参照蒋会勇等〔4〕方法并作部分改进，利用常用的国产石蜡，按常规方法制作空白蜡块作为受体蜡块，多器官常见癌/正常11种，每种3～5例，包括甲状腺乳头状癌、食管鳞癌、胃腺癌、结肠腺癌、直肠腺癌、肝细胞肝癌、胰腺导管癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺导管癌、肾透明细胞癌。正常人组织包括甲状腺、食管、胃、结肠、直肠、肝、胰腺、肺。生殖系统癌/正常5种，每种3～10例，包括前列腺癌10例，乳腺癌7例，卵巢癌7例，子宫颈鳞状细胞癌3例，子宫内膜癌4例。首先对于每一个石蜡块要进行切片，采用受体针组织阵列仪的方法在蜡块上制备扎针受体，在每个蜡块切2张切片，厚4 μm，将供体组织芯放入受体蜡块的受体孔中。依次添入组织芯，5℃烤3 h，置于4℃冰箱保存备用，最后设计并制作成功14行×9列和10行×6列组织芯片两个。每张切片偶有1～2 个位点未切全或掉片(图1)。

图1　全器官及生殖系统组织芯片大体图

1.3免疫组化方法采用EnVisionTM二步法，65℃烤片2～4 h，组织芯片脱蜡至水；在功率850 W的微波炉中加热20 min后用蒸馏水冲洗2 min；再浸泡于枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)中，再加热3 min，有效消除过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗2 min；PBS 冲洗，2 min×3 次；加入1∶100抗体稀释液稀释浓缩型兔抗人XB130多克隆抗体PAB16763(Abnova 生物公司)；37℃孵育2 h；PBS冲洗，2 min×3 次；滴加鼠抗兔(辣根过氧化物酶标记，EnVisionTM试剂盒，DaKo产品)，30 min后37℃孵育，PBS冲洗，2 min×3 次；DAB显色3 min自来水冲洗，采用苏木精复染，梯度乙醇脱水，XB130蛋白在血管内皮的表达为自身切片的阳性对照，每批实验设阳性和阴性对照。PBS 液取代一抗作阴性对照。

1.4结果判定参照Shiozaki等〔5〕的方法，XB130 蛋白表达结果评分方法为，对着色细胞阳性率结合染色强度进行评分，染色强度评分标准：0分无色，1分淡黄色，2分棕黄色，3分棕褐色。阳性细胞按百分比评分标准：细胞未见染色为0分，<10%细胞阳性染色为1分，10%～50% 2分，50%～80% 3分，>80% 4分。将每张切片着色程度得分与百分率得分相乘为最后得分，0～1 分为“﹣”；2～4 分为“+”；5～7 分为“”；8～12 分为“”；“”为蛋白高表达，“-～+”低表达，为中度表达。

2结果

2.1XB130蛋白在正常组织中的表达组织芯片10种正常组织中，肺泡上皮、子宫内膜未见XB130 蛋白阳性表达，其余7种正常组织均可见不同程度阳性表达。在食管黏膜、肝脏组织、宫颈组织、结肠黏膜、胃黏膜、直肠黏膜、胰腺、乳腺组织、卵巢组织、正常前列腺可见部分细胞XB130蛋白低～中度表达，胃黏膜、肾皮质组织、甲状腺组织中高表达(图2，图3)；此外，在淋巴结、皮肤、脑组织也可见部分细胞XB130 蛋白低表达。

2.2XB130蛋白在肿瘤组织中的表达图4，图5可见，18种肿瘤组织，除子宫鳞状细胞癌中阴性表达，其余肿瘤组织均可见不同程度的XB130 蛋白表达。其中胰腺导管腺癌、前列腺腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌、乳腺导管原位癌、卵巢间变型无性细胞瘤等肿瘤细胞XB130蛋白高表达；正常组织和卵巢浆液性乳头状腺癌、食管鳞状细胞癌、卵巢囊腺癌等肿瘤低至中度表达。前列腺癌旁组织或者间质纤维明显增生的前列腺组织及增生期子宫内膜可见XB130 蛋白低～中度表达。

图2　正常组织HE染色(×200)

图3　各组XB130蛋白表达(DAB，×200)

图4　肿瘤组织HE染色(×200)

图5　各肿瘤组织XB130蛋白表达(DAB,×200)

3讨论

肌动蛋白丝相关蛋白(AFAP)是一种小型的接头蛋白家族。在克隆人类AFAP(hAFAP)的过程中发现了一种新型接头蛋白，命名为AFAP1L-2，也叫XB130。XB130在细胞质弥漫性分布，具有信号传导的作用，并且细胞黏附需要AFAP形成肌动蛋白纤维〔6〕。Liu等〔7〕发现XB130在人甲状腺和脾脏中高表达，与本研究结果一致。甲状腺癌中XB130为低表达，但是呈现出促进甲状腺肿瘤的生长。XB130的沉默导致甲状腺癌细胞增殖、迁移能力降低，异体移植瘤的生长速度减慢，提示XB130在甲状腺癌中有促癌作用〔8，9〕。在胃癌中，用5-FU治疗的患者中，XB130高表达的患者比低表达的有较高的生存率。高表达XB130可能是胃癌患者预后高生存率和低复发率的一个诊断标志物〔10〕。这样矛盾的基因差异并不少见，如低表达的癌基因Bcl-2和Bcl-B为胃癌预后的不良因素〔11〕，而抑癌基因p53的过量表达会降低整体生存率〔12〕。在胰腺导管癌中XB130表达与胰腺导管癌临床分期、转移和生存之间的关系，证明XB130高表达时胰腺导管癌分级越高，更易转移和更短的生存时间〔13〕，与本研究结果一致。本研究提示XB130 蛋白可能在前列腺癌的发生发展中发挥促进作用，可能成为判断前列腺癌的新标志。

用小分子RNA干扰人肺上皮细胞内源性XB130降低c-Src活性，产生IL-8并发生Akt磷酸化〔14〕。进一步研究发现，XB130结合磷脂酰肌醇-3-激酶的亚基p85a，随后通过RET/PTC通路介导甲状腺癌细胞的信号传导〔15〕，并导致自发凋亡和增强凋亡刺激物诱导的细胞死亡。此外，XB130具有高亲和性lamellipodial的F-肌动蛋白网状结构，并参与肿瘤细胞的运动和侵袭〔16〕。在甲状腺癌中利用短发夹RNA干扰XB130表达后，可引起基因表达谱发生显著改变，其中57个基因都与细胞增殖或生存，其中包括许多转录调节。路径分析显示，涉及XB130的疾病，排名靠前的都是与癌症相关，并且最主要的分子和细胞的功能是细胞生长、增殖及细胞周期〔17〕。这些研究结果提示，XB130的表达可能会影响细胞的增殖、存活、迁移和侵袭。本文首次发现前列腺癌中也可见XB130 蛋白的高表达，深入研究XB130在肿瘤发展过程中的机制，能使其成为癌症的新治疗靶点。

4参考文献

1Xu J，Bai XH.XB130，a novel adaptor protein for signal transduction〔J〕.J Biol Chem,2007;282(22):16401-12.

2Dougherty JD,Garcia ADR,Nakano I,etal.PBK/TOPK expression in human normal and tumor tissues by tissue microarray〔J〕.J Clin Exp Pathol,2007;23(4):450-2.

3Lodyga M，De Falco V，Bai XH，etal.XB130，a tissue-specific adaptor protein that couples the RET/PTC oncogenic kinase to PI 3-kinase pathway〔J〕.Oncogene，2009;28:937-49.

4蒋会勇，张三泉，张进华，等.国产石蜡制作组织微阵列的探索及应用评价〔J〕.第四军医大学学报，2006；27(1)：93-4.

5Shiozaki A，Lodyga M，Bai XH，etal. XB130，a novel adaptor protein，promotes thyroid tumor growth〔J〕.Am J Pathol，2011;178(1):391-401.

6Shi M,Huang WZ,Lin L,etal.Silencing of XB130 is associated with both the prognosis and chemosensitivity of gastric cancer〔J〕.PLoS One,2012;7(8):e41660.

7Liu X，Cai H，Huang H，etal. The prognostic significance of apoptosis-related biological markers in Chinese gastric cancer patients〔J〕.PLoS One,2011;6(12):e29670.

8Krajewska M，Kitada S，Winter JN，etal.Bcl-B expression in human epithelial andnonepithelial malignancies〔J〕.Clin Cancer Res,2008;14(10):3011-21.

9Xu JD，Furuya T，Cao XX，etal.Loss of BCL2L10 protein expression as prognostic predictor for poor clinical outcome in gastric carcinoma〔J〕.Histopathology,2010;57(6):814-24.

10Liu X，Wang S，Xia X，etal. Synergistic role between p53 and JWA: prognostic and predictivebiomarkers in gastric cancer〔J〕.PLoS One,2012;7(12):e52348.

11Zhang ZL，Jiang XL,Zhan J.Prognostic significance of XB130 expression in surgically resected pancreatic ductal adenocarcinoma〔J〕.World J Surg Oncol,2014;12:49.

12Alexandropoulos K，Baltimore D.Coordinate activation of c-Src by SH3-and SH2-binding sites on a novel p130Cas-related protein〔J〕.Sin Genes Dev,1996;10(11):1341-55.

13Grieco M，Santoro M，Berlingieri MT，etal. PTC is a novel rearranged form of the ret proto-oncogene and is frequently detected in vivo in human thyroid papillary carcinomas〔J〕.Cell,1990;60:557-63.

14Kondo T，Ezzat S，Asa SL.Pathogenetic mechanisms in thyroid follicularcell neoplasia〔J〕.Nat Rev Cancer,2006;6:292-306.

15Lodyga M，Bai XH，Kapus A，etal. Novel adaptor protein XB130 is a Rac controlled component of lamellipodia，which regulates cell motility and invasion〔J〕.J Cell Sci,2010;123(Pt 23):4156-69.

16白美玲，张凡，张林西，等.Ang-2和Tie-2在食管鳞癌患者肿瘤组织中的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2010;30(15):78-9.

17王成红.肿瘤坏死因子-β在老年淋巴瘤患者肿瘤组织和血浆中的表达〔J〕.中国老年学杂志，2013;33(2):25-7.

〔2013-09-19修回〕

(编辑苑云杰)