史文静，杨建刚，肖志强

(1.陕西中药研究所，陕西 咸阳 712000;2.陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075)

肾康平胶囊是由山茱萸、菟丝子、金银花等七味中药组成的中药复方制剂，具有保肝、清热利尿、益肾化浊的功效，在临床上主要用于热淋涩痛、急性肾炎水肿、慢性肾炎急性发作等症［1］。为有效控制肾康平胶囊的质量，以山茱萸中主要成分马前苷为指标性成分，采用HPLC 测定肾康平胶囊中马钱苷含量，并进行方法学研究，为肾康平胶囊质量标准研究提供一定的理论基础。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

对照品马钱苷(批号111640-201005)，购自中国药品生物制品检定所;肾康平胶囊(批号20140301，20140302，20140303)，自制;乙腈，色谱纯;超纯水。

Agilent 1260 型高效液相色谱仪;AG-135 型电子天平;KQ-300VDE 型超声波清洗器。

1.2 色谱条件

色谱柱为Kromasil C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流 动 相 为 乙 腈-水(15 ∶ 85 )，流 速1.0 mL/min，检测波长240 nm，室温进样，进样量20 μL。理论板数按马钱苷峰计算应不低于4 000;用外标法计算含量。

1.3 溶液制备

1.3.1 对照品溶液 取马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成含马钱苷0.43 g/L 的对照品储备液。1.3.2 供试品溶液 取胶囊内容物约1.0 g，精密称定，置于100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min。放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液。

1.3.3 阴性样品溶液 按处方比例，称取除制山茱萸以外的其余药味，按肾康平胶囊制备工艺制成缺马钱苷的阴性样品，按照1.3.2 节方法制成阴性样品溶液。

1.4 实验方法

取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按照色谱条件测定，结果见图1。

图1 对照品(A)、肾康平胶囊(B)和空白(C)的HPLC 图Fig.1 HPLC map of contrasts(A)，Shenkangping capsule(B)and solvent(C)

由图1 可知，马钱苷的保留时间约4.62 min，供试品色谱中马钱苷峰与杂峰分离效果良好，阴性对照样品在相应位置上无干扰峰。

2 结果与讨论

2.1 供试品溶液制备方法的选择

以50%甲醇为溶剂，分别考察了超声提取、加热回流等方法的提取效果，其中超声提取法的提取效果最好，检测杂质峰明显减少，马钱苷峰分离良好，同晏桂敏等研究结果一致［2］。

2.2 流动相的选择

考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)［3］、四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)［4］及乙腈-水(15∶ 85)［5］等流动相。结果表明，乙腈-水(15∶85)为流动相能达到满意的分离效果，供试品中马钱苷峰达到基线分离，峰形对称，且分离度较好，出峰时间为4.62 min。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取浓度0.43 g/L 的马钱苷对照品储备液0.3，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用80% 甲醇稀释，并定容，得浓度为0.012 9，0.021 5，0.043，0.064 5，0.086 g/L 对照品溶液。分别精密吸取20 μL 注入液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积对浓度进行作图，得线性方程A=36 445C－108.1，R2= 0.999 9。表明马钱苷在0.012 9 ～0.086 g/L 范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4 精密度

吸取浓度0.043 g/L 的马钱苷对照品溶液，重复进样6 次，结果马钱苷峰面积RSD 为0.48%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性

取肾康平胶囊(批号20120701)内容物约1.0 g，精密称定，制备6 份供试品溶液。精密吸取供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h 进样，记录马钱苷峰面积。结果RSD 为0.92%(n =6)，表明肾康平胶囊供试品在10 h 内稳定。

2.6 重复性

取肾康平胶囊(批号20140301)内容物约1.0 g，精密称定，制备6 份供试品溶液进行测定。结果RSD 为1.58%(n =6)，表明本方法重复性良好。

2.7 加样回收率

取已知浓度的肾康平胶囊(批号20140301)内容物约0.5 g，共6 份，精密称定，加入具塞锥形瓶中，分别精密加入浓度0. 43 g/L 的对照品溶液1 mL，再精密加入50%甲醇24 mL，精密称定，超声处理30 min，放置室温，精密称定，用50%甲醇补足重量。制备供试品，按色谱条件测定，记录峰面积，计算回收率，结果见表1。

表1 马钱苷加样回收率(n=6)Table 1 Recovery tests of loganin

由表1 可知，平均回收率为100.13%，表明本方法回收率良好，RSD 为1.78%(n=6)。

2.8 供试品含量测定

取肾康平胶囊3 批的内容物，制备供试品溶液，按色谱条件进样测定，计算马钱苷的含量，结果见表2。

表2 肾康平胶囊中马钱苷含量测定结果(n=3)Table 2 Content determination results of loganin in samples

3 结论

本文采用HPLC 测定肾康平胶囊中马钱苷的含量，Kromasil C18色谱柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长240 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果表明，马钱苷在0.012 9 ～0.086 g/L 呈良好的线性关系，R2=0.999 9，加样回收率99.02%(n =6)，RSD 值1.78%。本方法简便、准确、重现性好，可用于肾康平胶囊中马钱苷的质量控制。

［1］ 李雅梅，李华，李春荣.山茱萸化学成分及其药理作用研究进展［J］.武警医学院学报，2010，19(6):500-502.

［2］ 晏桂敏，林燕飞，孙静芸，等. 山茱萸中马前苷含量测定的样品处理方法改进［J］.中国药业，2005，14(10):38-39.

［3］ 程世云，邓祖磊，黄丽丹，等.山茱萸药材HPLC 特征图谱研究［J］.中国药事，2012，26(12):1353-1356.

［4］ 王裴芳，谢丽，许保海.六味地黄颗粒中马前苷含量测定的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(8):52-53.

［5］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典［S］. 一部. 北京:化学工业出版社，2010:26.