正交试验法优选葛根配方颗粒的提取工艺

2015-12-14杜远东

中国民族民间医药 2015年15期

杜远东

陕西省汉中市食品药品检验检测中心，陕西汉中 723000

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata (Wild.)Ohwi 或甘葛藤P.thomsonii Benth 的干燥根，其主要活性成分为异黄酮类化合物，如葛根素、大豆素、大豆苷等。葛根配方颗粒是葛根饮片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药颗粒剂［1］。将葛根饮片制备为颗粒剂，可以有效地去除植物纤维等无活性成分，增加稳定性，易储存，服用方便。

1 材料与仪器

1.1 材料葛根(西安盛兴饮片厂);葛根素对照品(批号:0766-200611，中国药品生物制品检定所);甲醇(色谱级);超纯水(实验室自制)。

1.2 仪器 Waters 高效液相色谱仪(Waters2695 Separations Module，Waters2996 PAD 检测器)，含在线真空脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱;梅特勒GB204 电子天平;SB3200DT 超声波清洗机(宁波新茎生物科技股份有限公司);101 型电热鼓风干燥箱(北京科伟永鑫实验仪器设备厂);艾柯-Advanced-06 型超纯水机(成都唐氏康宁科技发展有限公司)。

2 方法与结果

2.1 提取方法

2.1.1 采用传统工艺提取称取100g 药材，加入水量没过药材面1～2cm 即可，浸泡0.5h，用武火煎煮至沸腾，然后改用文火煎煮，30min/次，提取2 次，合并药液，浓缩，定容至250ml，备用。

2.1.2 水沸后提取称取100g 药材，加入沸水中，水量以没过药材面1～2cm 即可，武火煮沸后，改用文火，30min/次，提取2 次，合并药液，浓缩，定容至250ml，备用。

2.1.3 水提称取药材100g，分别加入10、8 倍量的水提取，第一次提取1h，第二次提取30min，滤出药液，合并药液，浓缩，定容至250ml，备用。

2.1.4 60%乙醇提取［2］称取100g 药材，加入5 倍量的60%乙醇回流提取，第一次提取1.5h，第二次提取1 h，滤取药液，合并药液，减压回收乙醇，定容至250ml，备用。

2.1.5 95% 乙醇提取称取100g 药材，加入5 倍量的95%乙醇回流提取，第一次提取1.5h，第二次提取1 h，滤取药液，合并药液，减压回收乙醇，定容至250ml，备用。

2.2 高效液相色谱测定含量

2.2.1 色谱条件［3］以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(25∶75);检测波长:250nm。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素标准品10.4mg，加30%的乙醇定容至50ml，稀释5 倍，制成2mg/50ml 的对照品溶液，用微孔滤膜过滤，备用。

2.2.3 供试品溶液吸取各样品溶液2ml，用30%的乙醇定容至100ml，用微孔滤膜过滤，备用。

2.2.4 结果由表1 可知，60%乙醇提取所得的葛根素含量最高，因此溶剂选择60%乙醇。

表1 不同提取方法葛根素含量结果

2.3 正交设计试验优选葛根提取工艺选取浸泡时间(A)、加醇量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)四个水平，以葛根素含量与干膏收率为指标的进行正交试验，优化葛根提取工艺。按“2.2”的方法测定葛根素含量，因素水平、正交试验、正交试验结果、直观分析、方差分析的结果见表2、3、4、5、6。

表2 正交因素水平表

表3 正交试验设计

表4 正交试验结果

表5 直观分析

表6 方差分析

以干膏收率与葛根素含量的综合评分为考察指标，直观分析表(表5)中极差R 值最小的为误差项。对各因素进行直观分析，A 因素:K2＞K3＞K1;C 因素:K2＞K3＞K1。D 因素:K2＞K3＞K1;B 因素干膏收率为K1＞K3＞K2;含量测定为K2＞K3＞K1，综合考虑，B 因素选K3。根据以上结果分析得出工艺为A2B3C2D2，即为用60%乙醇，12倍的量，浸泡1h，提取2 次，每次1.5 h。