刘德贤，陶遵威

（1.天津中医药大学，天津 300073；2.天津医药科学研究所）

正交实验法优选调经颗粒的提取工艺

刘德贤1、2，陶遵威2△

（1.天津中医药大学，天津 300073；2.天津医药科学研究所）

目的：优选复方制剂调经颗粒的最佳提取工艺。方法：采用正交实验法，以加水倍数、煎煮次数、提取时间为因素，芍药苷含量、收膏率为考察指标，采用高效液相色谱法检测芍药苷含量，以确定最佳提取工艺。结果：复方制剂调经颗粒的最佳提取工艺为：药材加10倍量水煎煮两次，每次1小时。结论：本研究所确定的调经颗粒的最佳提取工艺可为调经颗粒的生产和质量控制提供依据。

调经颗粒；正交实验法；芍药苷；收膏率

调经颗粒是院内制剂，主要由白芍等8味中药组成，具有补血养血、解痉镇痛、敛阴止汗等作用，现代临床常用于治疗月经紊乱、经期腹痛、崩漏、带下等常见妇科病。为能最大限度的提取芍药苷等有效成分和保证药效，本研究参考相关文献，以调经颗粒中君药白芍为考察对象，以颗粒中芍药苷含量为主要指标、收膏率为辅助指标，采用正交实验法，优化调经颗粒的提取工艺，以期为调经颗粒的临床应用提供实验依据。

1 仪器与材料

LC-20AT型岛津高效液相色谱仪，PDA检测器（日本岛津公司），乙腈（色谱纯，迪马科技有限公司），芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1110736-200934），白芍等8味药材（安国市康达中药材有限公司）。

2 方法与结果

2.1 正交实验设计 根据文献资料及预实验结果，影响有效成分提取效果的主要因素为加水倍数（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）。上述每个因素设计3个水平，采用L9（34）正交实验表，对调经颗粒的提取工艺进行优选，因素水平见表1：

表1 因素水平

2.2 实验方法 取9份调经颗粒中各药材，按2.1（水平1）的条件分别加适量水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20-1.25（85℃）的浸膏，80℃以下干燥得干膏。称定干膏质量，计算干膏率。精密称定干膏，加甲醇溶解，超声提取，高效液相色谱法测定芍药苷含量。

2.3 芍药苷的含量测定

2.3.1 色谱条件：色谱柱：Agilent XDP-C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（14：86）；流速：1ml/ min；检测波长：230nm；柱温：40℃；进样量：10μl；理论塔板数不低于2000。

2.3.2 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成68μg/ml的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备：精密称定2.2中干膏1g，加甲醇，超声20min，放凉，定容至20ml。滤过，续滤液过0.45 μ m滤膜，备用。

2.3.4 阴性供试品溶液的制备：取处方中除白芍外的药材按2.2的方法制备干膏，然后按2.3.3的方法制备白芍阴性供试品溶液。

2.3.5 专属性实验：精密吸取上述对照品、供试品和阴性供试品溶液各10μl，按2.3.1的色谱条件测定，阴性供试品色谱图中，在与芍药苷对照峰相应的位置无干扰峰（附图）。

附图 调经颗粒中芍药苷HPLC色谱图

2.3.6 线性关系考察：精密吸取对照品溶液2、4、10、15、20μl，按2.3.1的色谱条件测定，以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标，得回归方程为：Y=96538X+18534（r=0.999），表明芍药苷在0.136-1.36μg范围内线性关系良好。

2.3.7 精密度考察：取芍药苷对照品溶液，按2.3.1的色谱条件连续进样6次，记录峰面积，RSD为1.26%，说明仪器精密度良好。

2.3.8 稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h按2.3.1的色谱条件测定，记录峰面积，RSD为1.42%，说明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.9 重复性实验：同一条件下平行提取6份样品，按2.3.1的色谱条件测定，记录峰面积，RSD为1.14%，说明本方法重复性良好。

2.3.10 加样回收率实验：取已知含量三批供试品6份，每批2份，分别加入低、中、高质量浓度的芍药苷对照品溶液，按2.3.3的方法制备供试品溶液，按2.3.1的色谱条件测定，记录峰面积，计算芍药苷平均回收率为99.52%，RSD为0.61%，结果见表2：

表2 芍药苷加样回收率试验结果

2.3.11 样品含量测定：按2.1设计的正交实验制备9份干膏，按2.3.3中方法制备供试品溶液，分别精密吸取，按2.3.1的色谱条件测定，分别计算1g白芍中芍药苷的含量，结果见表3：

表3 正交实验结果

2.4 干浸膏收率的测定 按2.2的方法制备干膏，精密称定，计算干浸膏收率=（干浸膏重量/单倍量药材重量）×100%，结果见表3。

2.5 考察指标及评分方法 以芍药苷含量和干浸膏重量为指标综合评价，对表2结果用综合加权评分法处理［1］：芍药苷为复方制剂中主要成分且为主要考察指标，记70%；干浸膏重量为辅助指标，记30%。综合评分=［（芍药苷含量/芍药苷含量最大值）×70%+（干浸膏收率/最大干浸膏收率）×30%］×100%。

2.6 正交实验结果 以芍药苷含量和干浸膏重量为考察指标，综合评价，结果见表3，方差分析见表4。由方差分析表可知，各因素对芍药苷含量和干浸膏率大小的影响顺序：提取时间＞加水量＞提取次数，三个因素比较差异无统计学意义。综合考虑结果与实际生产两方面，确定最佳工艺为B1A2C2，即加10倍水煎煮1小时，煎煮2次。

表4 方差分析表

3 讨论

本课题组前期对调经颗粒制备工艺进行了单因素考察，选出了三个最佳单因素水平，再在单因素考察的基础上以芍药苷含量和干浸膏率为指标采用正交实验对提取工艺进行了优选。结果显示，三个因素比较差异无统计学意义。

调经颗粒中白芍为君药，现代临床研究显示，白芍具有养血补血、柔肝止痛等作用［2-3］。而芍药苷化学性质稳定，易于控制检测，因此以白芍中芍药苷含量为主要考察指标。本研究采用综合加权评分法，以芍药苷含量为主要考察指标、干浸膏率为辅助指标进行综合评分，以确定调经颗粒的最佳提取工艺。

本研究通过正交实验确定了调经颗粒最佳水提工艺为：10倍水煎煮两次，每次1小时，且结果表明本研究中的工艺条件稳定可行，重现性好。

［1］刘弘，王俊杰，张玲昂，等.加权综合评分法优化心得宁口服液提取工艺的研究［J］.中医学报，2014，29（1）：76-78.

［2］李春香，丁里玉，丁芳，等.白芍养血柔肝止痛作用与其配伍及芍药苷含量的相关性研究［J］.中药新药与临床药理，2011，22（1）：54-56.

［3］何晓燕，李真贞. 白芍对血虚小鼠补血作用的研究［J］.时珍国医国药，2009，20（4）：999-1000.

（基础医学栏目编辑：陈志宏）

OPTIMIZATION OF EXTRACTING TECHNIQUES OF TIAOJING GRANULES BY ORTHOGONAL EXPERIMENT

LIU De-xian， TAO Zun-wei
(Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300073,China)

Objective: To optimize the optimum extraction process of Tiaojing granules. Methods: The optimum extraction process was determine by detecting the peaoniflorin content with HPLC， taking volume of water， times of decoction and extraction time as factors， peaonifl orin content and yield as indexes.Results: The optimum extraction process was adding 10 times amount of water， extracting 2 times and every time with 1 hour. Conclusions: The optimum extraction process in this study can provide basis for production and quality control of Tiaojing granules.

Tiaojing granules； Orthogonal experiment； Peaonifl orin； Yield rate

R284.2

A

1004-6879（2015）03-0195-03

2014-11-27）