吴尚华，沈玉鹏，杨志华，魏桂梅

（1.甘肃省中医院白银分院，甘肃 白银730090；2.甘肃省中医院，甘肃 兰州730050）

自拟宣肺定喘汤对咳嗽变异性哮喘模型大鼠血清INF-γ和IL-4水平的影响

吴尚华1，沈玉鹏2，杨志华2，魏桂梅1

（1.甘肃省中医院白银分院，甘肃 白银730090；2.甘肃省中医院，甘肃 兰州730050）

咳嗽变异性哮喘；宣肺定喘汤；免疫调节；INF-γ和IL-4

咳嗽变异性哮喘（CVA）又称隐匿性哮喘，是以气道过敏高反应及慢性气道炎症为主要表现的一种特殊类型的哮喘，易因感冒、化学物质刺激、气候骤变等诱发或加重［1］，临床上30%的干性咳嗽是由咳嗽变异性哮喘所致，且其发病率有增高的趋势［2］。新近研究发现，CVA主要体现为气道慢性炎症反应，表现为气道高反应、高敏感症状，二者密切相关。实验研究发现，Th1/Th2比值低于正常，或Th2功能亢进、Th1功能低下，均可以引起T淋巴细胞的含量异常，进而发挥免疫调节作用。本实验旨在研究自拟宣肺定喘汤对实验大鼠Th1、Th2型细胞因子（IFN-γ、IL-4）水平的影响，以探讨其对咳嗽变异性哮喘的免疫调节作用。

1 材料和方法

1.1 药物和剂量

1.1.1 宣肺定喘汤组由蜜麻黄、射干、黄芩、五味子、半夏、僵蚕、蝉蜕等组成。药材由甘肃省中医院药剂科提供。以0.38 g/ml为等效剂量，依次配置低、中、高剂量组溶液，并将其放置于4℃冰箱保存。

1.1.2 阳性对照组即小儿肺热咳喘颗粒（海南新中正制药有限公司，国药准字号Z20140102），由石膏、连翘、败酱草等药物组成，配制成浓度为0.429 g/m l的溶液，放置于4℃冰箱保存。

1.2 实验动物

选用健康的4周龄清洁级Wistar大鼠60只，雌雄各30只，体重（100±20）g，由兰州大学医学院动物实验中心提供（合格证号2014－11－006）。

1.3 实验仪器

大鼠IFN-γ、IL-4定量夹心ELISA检测试剂盒，均购自上海西唐生物有限公司。

1.4 实验动物分组

清洁级Wistar实验幼龄大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、宣肺定喘汤低剂量组、宣肺定喘汤中剂量组、宣肺定喘汤高剂量组（以上各组分别用A、B、C、D、E、F表示）。

1.5 模型复制

参照咳嗽变异性哮喘豚鼠模型复制方法［3］，采用卵蛋白和氢氧化铝激发致敏并用卵蛋白激发的方法复制CVA模型大鼠（依次用A、B、C、D、E、F组表示）。正常饲养1周，除空白对照组外，其余各组均在第1、第8天对每只大鼠腹腔注射10%的卵蛋白和A（lOH）3混合溶液1m l致敏。自第2周，将B、C、D、E、F组大鼠置于密闭有机玻璃罩内，给予含1%OVA溶液的生理盐水超声雾化激发20分钟，每天一次，共10天。激发前30分钟，C、D、E、F组分别灌胃给药治疗。第3周进行咳嗽次数测定，从腹主动脉采血，用离心机分离血清，测定血清IFN-γ、IL-4含量。

模型评估：进行激发实验时，观察各组大鼠反应，症状表现有阵发性咳嗽、呛咳、毛发耸立、呼吸困难或憋气、呼吸频率增快等，有以上一种症状就提示造模成功。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 体征观察

空白对照组的大鼠体重稳定增长，毛色光亮，反应灵敏，行动敏捷，呼吸频率正常，节律规则。各实验组大鼠在激发实验前呼吸平稳，饮食正常，无特殊异常症状；激发实验后出现阵发性咳嗽、呛咳、打喷嚏、流清涕、呼吸急促、烦躁多动等症状。

2.2 各组大鼠血清IFN-γ检测结果比较（见表1）

表1提示，与空白对照组比较，模型对照组血清IFN-γ值明显降低（P＜0.05）；与模型对照组比较，阳性对照组，宣肺定喘汤高剂量组、中剂量组、低剂量组血清IFN-γ明显升高（P＜0.01）。

2.3 各组大鼠血清IL-4检测结果比较（见表2）

表2结果显示，与空白对照组比较，模型对照组血清IL-4值明显升高（P＜0.01）；与模型对照组相比，阳性对照组，宣肺定喘汤高剂量组、中剂量组、低剂量组血清IL-4明显降低（P＜0.05），且宣肺定喘汤低剂量组、中剂量组与高剂量组相比，具有显著性差异（P＜0.05）。

3 讨论

3.1 本病发病源于痰，解于痰

本病归属于中医的“咳嗽”、“喘证”、“哮病”等疾病范畴。古医籍中有关咳嗽的论述较多，《内经》云：“五脏六腑皆令人咳，非独肺也。”强调肺受外感因素影响，尤其以风邪为主，使脏腑功能失调，均可致咳嗽。本病的症状以慢性咳嗽反复发作为主。在病因上，外因为外感六淫之邪，其中以风为主；内因以饮食不节、肺脾气虚为主。在病机上，肺为娇脏，易受内外之邪侵袭而为病，肺气不宣、闭塞，肺管不利，气道挛急［4］，其宣发肃降功能失调，肺管的组织形态也随之发生改变，导致气管痉挛［5］。经研究表明：CVA的转归与平素正气虚弱、病位深浅、病情轻重、诊治是否得当有关。风邪外犯，引动宿痰，反复感冒，诱发伏痰，故而本病多喘息、喉中痰鸣、气急，且病情缠绵，病程较长。《症因脉治》说：“哮病之因，痰饮留伏，结成巢臼，潜伏于内，偶有七情之犯，饮食之伤……则哮喘之症作矣。”说明本病因痰饮内伏，遇饮食、情志及外感可诱发。肺为水之上源，脾胃乃水谷之海，肺、脾、肾三脏功能失调，津液代谢障碍，痰湿内盛是本病内在因素。治法多以宣肺化痰、清热化痰、健脾化痰、温肺化痰等为主。

3.2 中药复方宣肺定喘汤与小儿肺热咳喘颗粒药效学评估

本实验选用自拟宣肺定喘汤以宣肺止咳、祛风解痉为基本治法。麻黄性辛散，疏风宣肺，散寒平喘，以驱邪外出。杏仁、前胡降气止咳，宣降结合，适合肺脏特征，通调上焦气机。五味子性酸敛，麻黄性辛散，一收一散，调节气机，预防肺气宣发太过。地龙、蝉蜕属虫类药，解痉散风之力强，且地龙能缓急平喘，蝉蜕能解表。诸药相合，不寒不热，药性平和。现代药理研究认为，麻黄碱可松弛支气管平滑肌，且作用持久，可解除支气管平滑肌痉挛，起到镇咳、抗过敏作用［6］。杏仁为肺经之要药，可肃降肺气，止咳平喘，苦杏仁所产生的氰氢酸、苯甲酸能抑制呼吸中枢，使得呼吸加深，减少咳嗽频次，下气除喘，达到镇咳平喘的效果。小儿肺热咳喘颗粒具有清热化痰、宣肺化痰的作用，其主要由杏仁、石膏、金银花等11味中药组成，主要用于热邪所致的咳嗽、恶风、痰黄、喘息等症状，具有一定的局限性。而宣肺定喘汤除具有清热宣肺之基本功效外，还多用虫药，如僵蚕、蝉蜕、地龙等，具有息风止痉的作用，可缓解气道痉挛的症状，用于风邪引起的各种喘息发作性呼吸道疾病。

3.3 本病发病机制的探究

现代医学免疫学对于CVA发病机制的研究多集中于气道重塑及免疫因子调节两个方面。研究认为，T淋巴细胞为主要的免疫反应辅助细胞，按其功能主要分为Th1、Th2两种，前者具有调节免疫、抗感染的功能，后者可调控机体免疫变态反应，二者相互抑制，保持机体免疫的平衡状态，若机体发生变态反应，则免疫调节作用失常（Th1功能不足，Th2功能亢进，Th1/Th2的比值低于正常），故CVA气道的慢性炎症与高反应性有密切的联系［7］。Th1细胞又称炎症性T细胞，主要分泌INF-γ等，可促进Th0细胞向Th1细胞转化，具有较强的抗感染作用，同时亦可加强宿主自身免疫功能，从而提高自身抵抗力。Th2主要分泌IL-4、IL-5等，可刺激B细胞增殖并产生、分泌特异性抗体IgE，使其参与体液免疫。抗原和特异性的IgE交联可导致炎性介质释放的链式反应，通过INF-γ抑制IL-4的活性来减少体内IgE的生成，从而抑制喘息性疾病发作的早期过程。

据药物现代药理研究，组方中麻黄、半夏、蝉蜕、僵蚕、地龙诸药合用，可松弛支气管平滑肌，缓解支气管痉挛，抑制免疫炎症反应，从而达到免疫调节作用。因此，自拟宣肺定喘汤能借助抑制细胞因子INF-γ、IL-4的水平、降低机体抗原和特异性抗体交联，从而抑制或阻断咳嗽变异性哮喘的早期发病过程，这可能是中药复方治疗CVA的机制之一。

表1 各组大鼠血清IFN-γ含量（±s）

表1 各组大鼠血清IFN-γ含量（±s）

注：与空白对照组比较，▲P＜0.05；与模型对照组比较，#P＜0.01

组别例数IFN-γ（pg/ml）空白对照组10120.20±19.31模型对照组1082.46±12.24▲阳性对照组1092.86±11.16#宣肺定喘汤高剂量组10114.32±16.73#宣肺定喘汤中剂量组10101.67±10.36#宣肺定喘汤低剂量组1094.15±12.44#

表2 各组大鼠血清IL-4含量（±s）

表2 各组大鼠血清IL-4含量（±s）

注：与空白对照组比较，▲P＜0.01；与模型对照组比较，#P＜0.05；与宣肺定喘汤高剂量组比较，★P＜0.05

组别例数IL-4（pg/ml）空白对照组1012.36±2.13模型对照组1020.12±2.67▲阳性对照组1016.62±1.16#宣肺定喘汤高剂量组1015.96±2.53#宣肺定喘汤中剂量组1016.65±1.36#★宣肺定喘汤低剂量组1017.15±2.44#★

［1］中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.咳嗽的诊断与治疗指南（草案）［J］.中华结核和呼吸杂志，2005，28（11）：738-743.

［2］侯春光.二陈双龙汤治疗咳嗽变异性哮喘60例［J］.实用中医药杂志，2002，2（5）：23.

［3］Nishitsuji M，Fujimura M，Oribe Y，et al.A guinea pig model for cough variant asthma and role of tachykinins［J］.Exp Lung Res JT-Experimental lung research，2004，30（8）：723-737.

［4］谭婉君.辨证治疗咳嗽变异型哮喘［J］.江西中医药，2008，39（1）：39.

［5］李珊.风咳方治疗咳嗽变异性哮喘的临床观察［D］.北京：北京中医药大学，2012.

［6］张的凤，张金莲，吕宇虹，等.麻黄相关药物应用现状［J］.江西中医学院学报，2006，18（5）：76-77.

［7］Haczku A，Macary P，Haddad E B，et al.Expression of Th2-cytokines IL-4 and IL-5 and Thl-cytokines IFN-γ in ovalbumin-exposed sensitized Brown-norway rats［J］.Immunology，1996（88）：247-251.

G424.31

B

1671-1246（2015）18-0158-02

甘肃省中医药管理局资助项目（GZK-2014-30）