邹有土，白羊，葛平辉，阮卡，陈星

·技术与方法·

阿达木单抗ELISA定量检测方法的建立

邹有土，白羊，葛平辉，阮卡，陈星

治疗性单抗药物已经成为生物医药的重要组成部分，在疾病治疗上具有广阔的应用前景，成功用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。随着研究的深入及技术的进步，治疗性单抗药物呈现出良好的发展势头［1-2］。阿达木单抗是一种全人源的 IgG1型单克隆抗体，可靶向作用于在自身免疫疾病发病机制中起重要作用的促炎细胞因子——人肿瘤坏死因子（TNF-α）。类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）、多关节型幼年特发性关节炎（juvenile idiopathic arthritis，JIA）、银屑病关节炎（psoriatic arthritis，PsA）和强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）患者关节滑液中均发现 TNF-α水平增高，这与炎症发生和关节破坏密切相关［3-4］。阿达木单抗可特异性、高亲和地与TNF-α结合，并阻止它与细胞表面 TNF-α受体 p55和p75结合，从而拮抗 TNF-α的生物活性，减少表皮厚度和炎性细胞浸润［5-6］。

由于阿达木单抗的特殊疗效及其巨大的市场份额，许多医药企业通过生物仿制药的方式加入到该产品的开发和生产中。在开发和生产过程中必须建立起严格高效的质量控制方法，而含量的测定是重要的项目控制之一。本研究以hTNF抗原为包被抗原，羊抗人 IgG-HRP为检测抗体，建立了定量测定阿达木单抗的 ELISA方法，并对该方法进行了方法学研究。

1 材料与方法

1.1 材料

阿达木单抗注射液（修美乐，Humira）购自美国雅培制药；牛血清白蛋白（BSA）购自美国 Roche公司；hTNF抗原购自美国 BD Pharmingen公司；TMB购自美国 Fisher Scientific公司；羊抗人 IgG（H+L）-HRP购自美国 Pierce公司；……