蒋廷旺，熊怀民，张红星，许国华，许晔琼

（常熟市医学检验所，江苏常熟215500）

胆管上皮细胞TLR3内源性活化在原发性胆汁性肝硬化炎性损伤中的作用

蒋廷旺，熊怀民，张红星，许国华，许晔琼

（常熟市医学检验所，江苏常熟215500）

目的：研究内源性双链RNA活化人肝内胆管上皮细胞（human intrahepatic bi1iary epithe1ia1 ce11s，HiBEC）中To11样受体3（To11-1ike receptor 3，TLR3）引起的凋亡及其信号通路变化。方法：体外培养HiBEC，同时通过反复冻融制备坏死的HiBEC。TLR3活化组：将死亡细胞与活细胞共同培养6 h；对照组：以核酸酶处理过的坏死细胞与活细胞共培养，每组设3复孔。以Annexin V/PI测定细胞凋亡率，同时以JC-1荧光探针测定细胞线粒体膜电位。荧光定量PCR法检测TLR3和β干扰素To11样受体结构域衔接蛋白（To11-inter1eukin 1 receptor domain-containing adaptor inducing interferon-β，TRIF）的表达量，同时以流式细胞术测定Caspase-3的活性。结果：TLR3活化组的HiBEC经内源性活化后，凋亡率为（33.32±2.39）％，明显高于通过RNA酶处理后的对照组［（2.83±0.53）％，P＜0.001）；线粒体膜电位检测结果表明，TLR3活化组的HiBEC经内源性活化后，表达绿色荧光的细胞比例明显增加，均值为（34.75± 6.54）％，明显高于RNA酶处理后的对照组［（3.21±1.24）％，P＜0.001）；定量PCR分析发现TLR3活化组的TLR3和TRIF mRNA相对表达量分别为3.75±0.22和4.05±0.14，均明显高于对照组（分别为0.98±0.05和1.03±0.07，P＜0.001）；流式细胞术检测结果显示，TLR3活化组细胞Caspase-3的平均表达量为（27.1±3.5）％，明显高于RNA酶处理组［（8.5±2.1）％，P＜0.001）。结论：内源性双链RNA可以通过活化TLR3诱导HiBEC凋亡，可能在原发性胆汁性肝硬化的炎性损伤过程中发挥重要作用。

原发性胆汁性肝硬化；胆管上皮细胞；To11样受体3；内源性

原发性胆汁性肝硬化（primary bi1iary cirrhosis，PBC）的早期病理改变为肝内胆管上皮细胞（human intrahepatic bi1iary epithe1ia1 ce11s，HiBEC）周围的炎性细胞浸润，随着疾病的进展，肝内小胆管进行性消失，最终引起肝硬化和肝衰竭［1］。……