于善一 钟友刚 施振声

目前，犬精子的传统慢速冷冻法虽已广泛应用，但仍存在诸多不足。超快速冷冻法可以实现精子玻璃化，有望进一步提高冷冻质量。研究分别以蔗糖浓度为0M、0.05M、0.1M、0.125M、0.15M、0.2M、0.25M等渗溶液（约300mOsm/L）作为冷冻液，利用微粒法对犬精子进行超快速冷冻，并对复苏后精子的总活力、存活率、顶体完整性、畸形率进行评价。结果表明，0.125M蔗糖组的总活力为40.1±2.0%，存活率60.4±2.8%，顶体完整性65.6±10.5%，存在显著优势。超快速冷冻法能够消除传统方法中冷冻保护剂的毒性和污染，操作快捷、经济，但冷冻效果仍存在相当的提升空间，值得进一步研究与探讨。

一、概述

精子冷冻技术是犬繁殖项目中的重要技术。通过液氮对预处理后的精子进行超低温冷冻可以保存优良品种、提高繁殖效率、降低传染病风险。经典的犬精子冷冻技术需要添加甘油、卵黄或低密度脂蛋白等，作为精子的冷冻保护剂，同时应用价格昂贵的程序化冷冻仪进行“慢速”冷冻，全过程耗时3～4小时。另外，甘油作为一种渗透性冷冻保护剂的添加会直接引起细胞毒性，进而影响受孕率。而现在已有研究者利用超快速冷冻法进行人精子冷冻保存，并获得成功。该方法应用玻璃化冷冻的原理，最大程度减少细胞内外冰晶的形成，同时避免了甘油等渗透性冷冻保护剂的使用，高效、快速、成本低廉。本研究尝试将超快速冷冻法应用于犬精子冷冻保存，以求为今后犬繁殖相关科研、临床项目提供参考。

二、材料

（一）试验动物

选 用2～6 岁 公 犬4 头( 杂 种犬），饲喂全价日粮食。……