张建刚　叶知锋　黄伶　黄挺　张志娣

DC-CIK细胞联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床探讨

张建刚叶知锋黄伶黄挺张志娣

目的 探讨树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）联合化疗对晚期结直肠癌的疗效。方法 回顾性分析42例行DCCIK细胞疗法联合化疗的晚期结直肠癌患者的临床资料，采用1：1配对的方法，选择同期单独行化疗的42例晚期结直肠癌患者作为对照组。对两组的有效率（RR）、疾病控制率（DCR）、生存期及无疾病进展时间进行观察比较。结果 DC-CIK治疗组患者的疾病控制率（DCR）明显高于化疗组（76.19% VS 52.38%），差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组的中位生存期明显高于化疗组（17.5个月VS 13.3个月），差异有统计学意义（P=0.008）。结论 DC-CIK细胞联合化疗可以明显提高晚期结直肠癌患者的疾病控制率，延长生存期。

晚期结直肠癌 DC-CIK细胞 疾病控制率 生存期

近30年来，随着我国经济的迅速发展及国民生活饮食方式的改变，结直肠癌的发病率和病死率已明显升高，目前已位居常见恶性肿瘤的第4名。其中20%～25%的初诊患者即为Ⅳ期，失去手术根治机会，治疗以化疗为主，但疗效不满意。因此需探索新的大肠癌治疗手段，改善患者预后。以树突状细胞（Dendritic cell，DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells，CIK）为基础的肿瘤细胞免疫治疗成为目前研究的热点之一。自2010年4月至2014年6月间，作者采用DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗42例晚期结直肠癌患者，取得了较好的疗效，现总结报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 所选病例为本院行DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗的42例Ⅳ期结直肠癌患者，设为治疗组；并按1：1配对选择同期单独行化疗的42例Ⅳ期结直肠癌患者，设为对照组。治疗组男24例，女18例；年龄≤60岁16例、＞60岁26例。对照组男22例，女20例；年龄≤60岁15例、＞60岁27例。入组标准：均为病理组织学或细胞学检查确诊的Ⅳ期结直肠癌患者；KPS评分≥60分；预计生存期≥3个月；血常规、肝肾功能及心肺功能基本正常；所有患者均签署知情同意书。排除标准：心脏及肝肾功能不全；合并其它恶性肿瘤者；不能配合治疗及无法评估疗效者。两组性别、年龄、病理类型、转移部位、化疗方案等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2DC-CIK细胞的制备及回输 取患者抗凝外周血50ml，常规Ficoll分离单个核细胞（PBMC）。PBMC用pH 7.4的PBS洗涤3次，将细胞按2×106/ml数量悬浮于10%的RPMI-1640培养基培养2h，弃上清液，获得贴壁的PBMC。每孔加入rhGM-CSF、rhIL-4的完全培养基诱导DC，第5天加入IL-1β、PGE-2、TNF-α，置37℃ 5% CO2培养箱中继续培养48h，获得成熟的DC。PBMC经pH 7.4的PBS洗涤3次，将细胞按2×106/ml数量悬浮于10%的RPMI-1640培养基培养，加入TNF-γ、anti-CD3mAb、IL-2，诱导产生CIK。第7天将DC与CIK按照1：5比例混合培养5～7d，产生DC-CIK。收集12d诱导扩增后获得的DCCIK，用0.9%生理盐水配成200ml液体静脉回输，1次/d，每次回输细胞数约1×109，连续6次为1个疗程。

1.3治疗方法 患者按治疗方式不同分为两组：（1）DC-CIK治疗组：接受FOLFOX、XELOX、希罗达单药等方案化疗，联合DC-CIK细胞免疫治疗。化疗结束后5～7d开始行DC-CIK细胞回输治疗，回输前予地塞米松或异丙嗪针常规抗过敏预处理。每例患者行≥2个疗程的DC-CIK细胞免疫治疗。（2）对照组：单纯接受FOLFOX、XELOX、希罗达单药等方案化疗。

1.4观察指标 主要终点评价指标为生存时间，次要终点评价指标为无进展生存时间、近期疗效及不良反应。生存时间（OS）的计算由患者入组接受治疗开始，直至任何原因的死亡或最后1次随访。无进展生存时间（PFS）的计算由患者入组接受治疗开始，直至肿瘤进展或最后1次随访。

1.5疗效评价 根据1999年美国临床肿瘤学年会提出的实体瘤疗效评价标准进行疗效评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病稳定（SD）和疾病进展（PD），有效率（RR）=（CR+PR）/（CR+PR+SD+PD），疾病控制率（DCR）=（CR+PR+SD）/（CR+PR+SD+PD）。

1.6不良反应和随访 （1）不良反应：根据美国国立癌症研究所制定的通用药物毒性反应标准，将各种不良事件分为0～Ⅳ度。（2）随访：全部病例随访至2014年6月30日，无失访病例，随访率为100%。

1.7统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件。采用Kaplan-Meier生存曲线和Logrank test检验比较两组总生存率及无进展生存率。计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1疗效评价 DC-CIK治疗组的RR为45.24%，对照组的RR为28.57%，两组比较差异无统计学意义（P=0.113）；DC-CIK治疗组的DCR为76.19%，对照组的DCR为52.38%，两组比较差异有统计学意义（P=0.023），见表1。

表1　两组患者的临床疗效比较（n）

2.2生存分析 DC-CIK治疗组和对照组的中位生存期（mOS）分别为17.5个月（95%CI，15.34～19.66）、13.3个月（95%CI，12.22～14.38）。Kaplan-Meier生存曲线和Logrank test检验结果表明，治疗组的生存期明显长于化疗组（χ2=7.024，P=0.008）。见图1。

2.3无进展生存分析 DC-CIK治疗组和化疗组的中位无进展生存期（mPFS）分别为6.3个月（95%CI，5.41～7.19）、5.1个月（95%CI，4.52～5.68）。Kaplan-Meier生存曲线和Logrank test检验结果表明，治疗组的无进展生存期明显长于对照组（χ2=8.384，P=0.004）。见图2。

2.4不良反应观察 治疗组42例患者，有4例在回输DC-CIK细胞的过程中出现低热（体温＜38.5℃），无需特殊处理，自行降至正常。对心、肝和肾功能未见有明显影响，亦未见其它严重不良反应。

3　讨论

图1　两组总生存率比较

图2　两组无进展生存率比较

目前晚期结直肠癌的主要治疗方法为化疗及支持治疗，但常规化疗的疗效已达平台期，故需联合其他治疗方法以改善患者的预后。肿瘤免疫治疗既能直接杀灭肿瘤细胞又能增加机体的免疫功能，无明显不良反应，已成为抗肿瘤治疗的第4个主要治疗方法［1］。其中，DC-CIK是该领域中极具发展前景的免疫细胞，已在多种恶性肿瘤的治疗中取得一定的疗效，但在晚期结直肠癌中运用报道较少。

CIK是一种新型的过继免疫细胞，兼有T淋巴细胞特异性杀伤及自然杀伤（NK）细胞非主要组织相容性复合体（MHC）限制性杀伤能力［2］，其抗肿瘤活性强于以往的LAK细胞、CD3AK细胞。多项研究发现，CIK细胞对耐药的肿瘤细胞也有杀伤作用［3，4］，故CIK细胞治疗与化疗联合运用可产生协同效应。DC作为已知功能最强的抗原递呈细胞，是激活机体特异性抗瘤应答的关键，可有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸机制。国内有研究［5］表明：实体肿瘤病灶内DC浸润程度与患者预后有关，浸润DC数量高者，预后好。DC与CIK是高效和谐的肿瘤免疫治疗的两个重要组成部分，前者识别病原，激活获得性免疫系统，后者通过发挥自身细胞毒性和分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞。DC与CIK共同培养后不仅能促进CIK细胞增殖、分化和增强细胞毒活性，而且能提高DC递呈抗原的特异性和促进DC的成熟［6］，从而发挥协同抗肿瘤的作用。

CIK抗肿瘤作用机制尚未完全明了，既往研究提示可能为以下途径：（1）CIK对肿瘤细胞的直接杀伤作用。CIK通过粘附因子LFA/ICAM-1途径与肿瘤细胞结合，释放颗粒酶和穿孔素，使肿瘤细胞裂解死亡［7］；（2）CIK能促进凋亡相关蛋白合成，诱导肿瘤细胞凋亡及坏死［8］；（3）CIK可分泌多种细胞因子，对肿瘤细胞有直接抑制作用，还能调节免疫系统间接杀伤肿瘤细胞。国内有学者［9］报道，化疗联合CIK治疗的结直肠癌患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均显著高于化疗前，提示CIK治疗可显著改善患者的免疫功能。

多项研究［10，11］亦表明，化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗比单纯化疗不仅可以提高晚期肿瘤患者的免疫功能，还可以提高患者的DCR，延长无疾病进展时间，改善生活质量，且不良反应少。本资料结果显示，化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗比单纯化疗可以提高晚期结直肠癌患者的DCR，延长总生存期及无进展生存期，不良反应可耐受。至于两组患者的RR差异不明显的原因，考虑可能与入组患者肿瘤分期晚（均为Ⅳ期）、恶性度高（低分化腺癌占比较高）及病例数较少有关，也有可能与免疫治疗起效较慢而不适合目前实体瘤疗效评价标准有关。因此，DC-CIK细胞免疫治疗作为一种新兴的抗肿瘤辅助治疗手段，只有与手术、放化疗等有机结合，才能获得更好的临床疗效。

综上所述，DC-CIK细胞联合化疗治疗晚期结直肠癌患者的疗效确切，不良反应少，值得临床推广。

1Rosenberg SA，Restifo NP，Yang JC，et al.Adoptive cell transfer：a clinical path to effective cancer immunotherapy.Nat Rev Cancer，2008，8（4）：299～308.

2Peng Wang，Jinpu Yu，Songyuan Gao，et al.Experimental study on the treatment of intracerebral glioma xenograft with human cytokineinduced killer cells. Cellular Immunol，2008，253（1～2）：59～65.

3李世俊，张连生，柴晔，等.树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对多药耐药肿瘤细胞系的杀伤活性.中华肿瘤杂志，2007，29（10）：733～737.

4Niu Q，Wang W，Li Y，et al.Cord blood-derived cytokine-induced killer cells biotherapy combined with second-line chemotherapy in the treatment of advanced solid malignancies. Int Immunopharmac ol，2011，11（4）：449～456.

5龚选举，阎玉虎，吴建平，等.肺癌组织中肿瘤浸润树突状细胞对预后的影响.中华肿瘤杂志，2000，22（2）：135～137.

6Wang YF，Kunda PE，Lin PE，et al.Cytokine-induced killer cells cocultured with complete tumor antigen-loaded dendritic cells，have enhanced selective cytotoxicity on carboplatin-resistant retinoblastoma cells. Oncol Rep，2013，29（5）：1841～1850.

7Marten A，Ziske C，Schottker B，et al.Interactions between dendritic cells and cytokine-induced killer cells lead to an activation of both populations. Immunother，2001，24（6）：502～510.

8Verneris MR，Kornacker M，Mailander V，et al. Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fas-mediated apoptosis. Cancer Immunol Immunother，2000，49（6）：335～345.

9张京雨，张晓明.CIK细胞过继性免疫治疗对结直肠癌化疗患者免疫指标的影响 . 肿瘤学基础与临床，2009，22（1）：51.

10Yang L，Ren B，Li H，et al. Enhanced anti-tumor effects of DC-activated CIKs to chemotherapy treatment in a single cohort of advanced non-small cell lung cancer patients. Cancer Immunol Immunother，2013，62（1）：65～73.

11Wu C，Jiang J，Shi L，et al. Prospective study of chemotherapy in combination with cytokine-induced killer cells in patients suffering from advanced non-small cell lung cancer. Anticancer Res，2008，28（6B）：3997～4002.

Objective To evaluate the effect of DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy in the treatment of advanced colorectal cancer. Methods We retrospectively analyzed 42 patients of advanced colorectal cancer treated with DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy and choose 42 patients at the same period as control treated only with chemotherapy.The response rate（RR），disease control rate（DCR），median overall survival time and progression-free survival time were investigated and compared between the two groups. Results The disease control rate in the DC-CIK treatment group was significantly higher than that in the chemotherapy group（76.19% VS 52.38%），and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The median overall survival time in the DC-CIK treatment group was significantly longer than that in the chemotherapy group（17.5 VS 13.3months），and the difference was statistically significant（P=0.008）. Conclusion DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy could significantly improve the disease control rate and the overall survival time of patients with advanced colorectal cancer.

Advanced colorectal cancer DC-CIK cells Disease control rate Survival time

310007 杭州市中医院肿瘤科