马晓旭

（本溪市中心血站检验科，辽宁 本溪 117000）

ELISA试验灰区设置对结果的影响

马晓旭

（本溪市中心血站检验科，辽宁 本溪 117000）

目的 探究ELISA试验灰区设置对结果的影响，为临床输注安全血液提供有效保障。方法 从2010年1月至2014年1月选取42例在我血站检验科经酶联免疫吸附法检测为乙型肝炎病毒表面抗原为阳性的献血者血清进行研究，探究灰区的设定对献血者最终检测结果的影响。结果 根据不同浓度血清检测结果可见，献血者血清ELISA检测的S/CO值随着血清浓度的增加而减小，CV则随着血清浓度的减小而增大；随着灰区设置范围的逐渐提高，检测的敏感度逐渐提高，特异度随之降低；通过理想状态下的计算（即X=1），得出CV=0.247，灰区上限=1.59，灰区下限=0.406，即灰区设置为0.406～1.59为最佳状态。结论 灰区设置能够明显影响到检测结果，本研究最佳灰区设置0.406～1.59，即在该灰区设置下，检测结果最为准确，实际检测中应视情况对灰区进行合理的设置。

ELISA；灰区；乙型肝炎

酶联免疫法是临床上应用最为广泛的检测方法之一，由于其具有价格低廉、操作简便、得出结果快的优点，因此其能得到医学界的认可［1］。但由于酶联免疫试剂是一种半定量试剂，使得其在进行检测时变异系数较大，灰区的范围相对较宽，因此合理的设置灰区分为对于实验结果有着重大影响［2］。本研究为探究ELISA试验灰区设置对结果的影响，特选取病例血样标本进行研究，得到了一些结论，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料：选取2010年1月至2014年1月在我血站检验科经双试剂检测为阳性42例献血者，所取标本均为乙型肝炎病毒表面抗原OD值均在0～0.1的阳性标本，其中男性患者22例，女性20例，年龄25～52岁，平均年龄（40.7±5.1）岁。所有标本均未出现凝集不完全、脂血、黄疸等现象。

1.2试剂及仪器：①试剂：HBsAg试剂由北京万泰生物制品有限公司提供，由北京康彻斯坦公司提供弱阳性质控品，浓度为0.2 IU，所有试剂均在其有效使用范围内。②仪器：采用帝肯EVO加样仪（瑞士帝肯公司）以及FAME全自动酶免分析仪（瑞士奥斯邦生物工程有限公司）。

1.3研究方法：将本研究所选取的42例标本，用AB型血清对所选标本进行一系列浓度的稀释，分别对各个浓度的血清标本进行重复检测20次，得到一组S/CO的值以及变异系数（CV），并计算平均值。

1.4统计学方法：采用SPSS13.0统计软件分析，百分比数据比较采用χ2检验，计量数据以（）表示，实施t检验，根据回归方程计算S/CO为1时临界值血清的CV，并计算出灰区的上下限。

2　结 果

2.1不同浓度血清的检测结果分析：根据不同浓度血清检测结果可见，献血者血清ELISA检测的S/CO值随着血清浓度的增加而减小，CV则随着血清浓度的减小增大。见表1。

表1　不同浓度血清的检测结果分析

2.2灰区范围变化对检测敏感度和特异度的变化分析：随着灰区设置范围的逐渐提高，检测的敏感度逐渐提高，特异度随之降低。见表2。

表2　灰区范围变化对检测敏感度和特异度的变化分析

2.3灰区范围：以S/CO为自变量，CV为应变量，采取拟合优度检验，选取出拟合度最好的回归方程（决定系数R2=0.999，P=0.001）。通过理想状态下的计算（即X=1），得出CV=0.247，灰区上限=1.59，灰区下限=0.406，即灰区设置为0.406～1.59为最佳状态。根据回归方程作图如下（图1）。

图1　不同浓度标本S/CO与CV的二次回归方程图像

3　讨 论

酶联免疫法是一种临床应用最为广泛的免疫测定法，但其会受到许多外界因素的影响，如板间差异，实验室温度等，会出现敏感性较低，非特异性结合较高的情况。此外，由于缺乏标准品的校验，再加上判读方式比较独特，使得同样的标本在多次测定中出现不同的吸光值的现象。如果这个吸光值很高或者很低，那这个样本最后得到的结果并不会受到影响，但是如果这个样本的吸光值在CO值的附近，则该样本的吸光值的波动则可能造成检测结果的差异。因此，灰区的设定对于实验检验结果存在一定程度上的影响。

为探究ELISA试验灰区设置对结果的影响，本研究特选取双阳性标本进行研究发现，随着灰区设置不同，结果产生了较大的差异。随着灰区范围的逐渐升高，检测的敏感度得到了提升。有报道选取了大量的实验样本进行研究发现，灰区分为S/CO值设定在0.684～1.314是目前使用价值最高的灰区范围。而本研究发现，随着标本血清的稀释，S/CO值在不断的减小，而CV值则相应的出现增大，由于HBsAg检测方法以及判定方式的特殊性，S/CO的值越大，则该标本阴性的可能性就越大，假阳性的发生概率则越小［3-4］。但考虑到对HBsAg进行酶联免疫检测会受到加样时间、孵育温度以及不同操作人员所造成的差异等因素的影响，使得CV的值会出现明显的变化，因此在进行实际的检验时，需要严格规范的按照说明书的流程进行操作。此外，本研究的灰区设置是在理想状态下进行的，但在实际情况中无法达到这种理想状态，在日常的实际操作中，这种理想状态是比较难达到的，所以无法直接得到实际的灰区设置。需要根据具体情况设定灰区范围。当灰区范围设定成功后，需要对所设定的灰区进行验证，以确定灰区设置的合理性。

综上所述，灰区设置会明显影响到检测结果的差异，合理的对分区范围进行设置能够有效减少假阳性、假阴性的发生概率，提高检测的准确度。

［1］魏兰华，梁俊，吴守成，等.ELISA法检测抗-HIV实验中灰区设置的探讨［J］.医学信息，2014，27（38）：219-219.

［2］陈善华，朱丽莉，李浩，等.ELISA方法检测HBsAg设置灰区的必要性探讨［J］.中国输血杂志，2013，26（10）：1013-1014.

［3］刘胡敏，陶传敏，黄锦江，等.ELISA检测丙型肝炎病毒设置灰区的必要性［J］.现代预防医学，2013，4（8）：1490-1491.

［4］陈显，朱绍汶，黄成垠，等.ELISA法检测抗-HCV灰区设置探讨［J］.临床输血与检验，2013，15（30）：243-244.

R446；R512.6+2

B

1671-8194（2015）29-0133-02