李廷军 邱婷婷

（山东省济南市第二人民医院，山东 济南 250001）

念珠菌体外药敏试验K-B法与E-test法的对照研究

李廷军 邱婷婷

（山东省济南市第二人民医院，山东 济南 250001）

目的 探讨分别采用K-B法与E-test法检测我院念珠菌体外药物敏感性，为临床合理用药提供参考。方法 随机选择我院2010年～2014年间的110例念珠菌眼炎患者，收集110例眼分泌物标本，接种培养念珠菌菌株110株，分别采用K-B法与E-test法检测念珠菌对于伊曲康唑、氟康唑的敏感率，比较检测结果的差异性。结果 采用K-B法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为88.2%，对氟康唑敏感菌株的检出率为97.3%；采用E-test法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为86.4%，对氟康唑敏感菌株的检出率为98.2%，二者的差异经统计学比较分析无明显差异（P＞0.05）。结论 采用K-B法与E-test法检测念珠菌体外药敏试验的结果具较高的符合率，均为较为理想的念珠菌体外药敏试验方法，可根据医院具体情况加以选择。

念珠菌；体外药敏试验；K-B法；E-test法

念珠菌是临床最为常见的条件致病真菌，正常时可寄居于人体皮肤、口腔、阴道等处，当某些情况导致机体免疫功能低下，或正常寄居部位微环境失调时，就容易导致念珠菌病，常见的有皮肤黏膜浅层或全身系统性感染，除皮肤念珠菌病之外，还可引起念珠菌性口腔炎、念珠菌性脑膜炎、念珠菌性菌血症、念珠菌性眼炎等［1］。随着临床抗真菌药物的大范围应用，念珠菌的耐药性与日俱增［2］，为保障疗效，有必要选择合理的方法对念珠菌进行体外药敏试验。

1　材料与方法

1.1菌株来源：选择2010年～2014年间我院收集的110株念珠菌分离菌株，标本取自110例念珠菌眼炎患者，其中男性62例，女性48例，患者年龄17～63岁，平均年龄（38.5±11.2）岁。感染白色念珠菌76例（占69.1%），近平滑念珠菌23例（占20.9%），光滑念珠菌7例（占6.4%），其他念珠菌4例（占3.6%）。

1.2所用材料：无菌棉拭子，琼脂培养基，E-test抗伊曲康唑药敏条（0.002～256 μg/mL，E-test抗氟康唑药敏条（0.002～256 μg/mL），伊曲康唑、氟康唑，药敏纸片等。

1.3菌种鉴定：将沾有分泌物的无菌棉拭子接种于沙氏培养基于30 ℃培养1～3 d，经镜检证实者从琼脂培养基上挑取纯化后菌落均匀悬浮于0.85%氯化钠溶液中，分别制成0.5和2麦氏浊度菌悬液，吸取250 μL的2麦氏浊度菌悬液加入培养液混匀，接种于鉴定板孔于35 ℃培养1～2 d，严格按照操作说明进行判断。

1.4K-B法药敏试验：吸取一定量0.5麦氏浊度菌悬液加生理盐水1∶1稀释，用无菌棉拭子沾取稀释后菌悬液从3个方向均匀接种于琼脂培养基，室温环境静置15 min，用无菌镊子夹取药敏纸片贴在琼脂表面，室温环境静置15 min后移入37 ℃恒温箱培养1～2 d。测量抑菌圈直径，按照相应标准读取药敏结果。

1.5E-test法药敏试验：无菌棉拭子沾取0.5麦氏浊度菌悬液从3个方向均匀接种于琼脂培养基，室温环境静置15 min，用无菌镊子夹取药敏试纸条紧贴于琼脂培养基表面，室温环境静置15 min后移入37 ℃恒温箱培养1～2 d。测量抑菌圈直径，按照相应标准读取药敏结果。

1.6判断标准：K-B法念珠菌对伊曲康唑敏感是指抑菌直径≥15 mm，对氟康唑敏感是指抑菌直径≥20 mm。 K-B法念珠菌对药物敏感是指≤0.125 μg/mL。

1.7统计学方法：所有数据均以SPSS17.0统计学软件进行分析，将检测结果的比较采取χ2检验，P＜0.05表明差异有统计学意义。

2　结 果

采用K-B法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为88.2%（97/110），对氟康唑敏感菌株的检出率为97.3%（107/110）；采用E-test法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为86.4%（95/110），对氟康唑敏感菌株的检出率为98.2%（108/110），二者的差异经统计学比较分析无明显差异（P＞0.05），见表1。

3　讨 论

近年来，随着抗生素、激素、免疫抑制剂的大量应用以及器官移植术的广泛开展，念珠菌病的发病率逐年升高［3］。念珠菌眼炎是由正常状态下人体的共生念珠菌在一定条件下导致的，往往出现在免疫机制受损、糖尿病患者、念珠菌血症、获得性免疫缺陷综合征等患者之中。以往念珠菌性眼炎在眼科感染性疾病之中所占比例较低，属于临床少见病，但随着免疫抑制剂、静脉高营养、长期抗生素应用、长期留置导管等的广泛使用，念珠菌造成眼部感染的病例数也呈显著增长趋势。念珠菌眼炎的最主要发病机制是念珠菌随血流进入脉络膜，随后大量繁殖，最终累及玻璃体及视网膜，主要临床表现为患眼疼痛、视力明显下降、眼前有漂浮物感，病变部位不同，病情的严重程度不一。对于多数病例而言，治疗不及时可能导致严重的眼内炎症甚至引起失明。因此对于念珠菌性眼炎患者，应采取积极的抗真菌药物治疗，包括口服、静脉输注以及眼内局部给药。而随着抗真菌药的广泛应用，耐药念珠菌也不断增加。为防止唑类抗真菌药交叉耐药，指导临床合理用药，保障治疗效果，对于念珠菌抗真菌药物敏感性的检测十分有必要。E-test法和K-B法是常用的念珠菌体外药敏试验方法，其中E-test法可直接测定药物抑菌浓度，准确性高，读取药敏结果直观便捷，但是所用材料订货周期较长，成本昂贵，一般性的医院难以用于临床常规检查，K-B法具有操作简单、成本低廉等优点［4-5］。

表1　K-B法和Etest法药敏检测结果比较（株）

本文研究表明，采用K-B法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为88.2%（97/110），对氟康唑敏感菌株的检出率为97.3%（107/110）；采用E-test法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为86.4%（95/110），对氟康唑敏感菌株的检出率为98.2%（108/110），二者经统计学比较分析无明显差异（P＞0.05），也证明K-B法与E-test法检测结果具有较高的符合率，操作简便可靠，成本低效率高，适合一般医院作为临床常规检测手段。

［1］ Miranda TT，Vianna CR，Rodrigues L，et al.Differential Proteinase Patterns among Candida albicans Strains Isolated from Root Canal and Lingual Dorsum: Possible Roles in Periapical Disease［J］.J Endod，2015，41（6）:841-845.

［2］ 苗琦，张石群，曹永兵，等.反转录转座子TCA4与白念珠菌耐药性的研究［J］.中国真菌学杂志，2012，7（5）:261-264.

［3］ Fichadia H，Layman L.Candida parapsilosis Tenosynovitis in an Immunocompetent Patient: Case Report and Review of Literature［J］.J Hand Surg，2015，40（5）:993-996.

［4］ 顾一心，何利华，陶晓霞，等.空肠弯曲菌琼脂稀释法和E-test法抗生素敏感性检测结果差异分析［J］.中国人兽共患病学报，2013，29（4）:335-338，348.

［5］ 张昭寰，郭丹凤，王敬敬，等.改良K-B法用于副溶血性弧菌耐药性检测［J］.微生物学杂志，2014，34（1）:78-83.

R446.5；R519.3

B

1671-8194（2015）24-0145-02