孙晓晨　孙磊磊　李小东

【摘要】 目的：克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的全长基因，并构建真核细胞表达质粒。方法：运用已合成的GDNFcDNA，加入自行设计的引物扩增GDNF基因，并与质粒pEGFP-C3连接，构建表达质粒。结果：PCR扩增的目的基因为630bp，对构建的表达质粒双切酶电泳及测序证明基因片段为630bp。 结论：正确克隆了GDNF基因并成功构建表达质粒，为下一步进行载体介导的体内转基因奠定了基础。

【关键词】 胶质细胞源性神经营养因子； 载体； 克隆

【中图分类号】R562.21 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0101-01

胶质细胞源性神经营养因子（Glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）是1993年Lin等从大鼠胶质瘤细胞B49中纯化获得的一种新型神经营养因子，化学结构为糖蛋白，并发现它具有促进多巴胺能神经元存活的功能[1] . Lin LFH，Doherty DH，Lile JD，et al.GDNF：a glial cell line-derived neurotrophic factor for midobrai dopaminergic neurons.[J].Science，1993，260（5111）：1130-1132]，后来进一步研究发现其对运功、感觉等多种神经元有营养作用。Oorschot等研究发现GDNF对培养的大鼠胚胎运动神经元存活具有重要作用，其效应分别是脑源性神经营养因子（BDNF）、睫状神经营养因子（CNTF）和人类胆碱能分泌因子-白血病抑制因子（CDF/LIF）的75倍，650倍，和2500倍[2] Oorschot DE，Mclennan IS.The trophic requirements of mature motoneurons.[J].Brain Res，1998，789（2）：315-321]，Annette等发现GDNF在胚胎期可以促进感觉神经元轴突的发育，在成熟期可以促进轴突的延长[3] Annette Markus，Tushar D，Patel，William D.Snider. Neurotrophic factors and axonal growth[J].Curr Opin Neurobiol，2002，12（5）：523-53]。由于其对神经的营养作用，目前被应用到脑缺血，帕金森病等的研究中。后来，在研究疼痛的过程中，发现其对神经源性疼痛具有强烈的镇痛与抑痛作用。但由于其在脑组织含量低，提取复杂，价格昂贵而限制了他的进一步引用。为此我们克隆了大鼠的GDNF基因，连于pcDNA3质粒，制备了带有目的基因的真核细胞表达质粒，为下一步研究载体介导的GDNF质粒的治疗作用打下基础。……