韩佳龙　毕良佳　庄德舒

[摘 要] 目的：对比甲苯胺蓝介导的光动力疗法与羧甲基壳聚糖银治疗大鼠牙周炎疗效。方法：选择20只实验室SD大鼠，于大鼠上颌右侧建立实验性大鼠牙周炎模型，随机将20只大鼠分为A、B两组，每组10只。对A组大鼠实施甲苯胺蓝介导的光动力疗法治疗，对B组大鼠实施羧甲基壳聚糖银（CMCT-Ag+）治疗。1周后观察两组大鼠治疗前后灭菌效果以及牙龈出血指数（SBI）、牙菌斑指数（PLI）。结果：治疗1周后，两组中细菌总菌落数以及牙龈卟啉单胞菌菌数均显著低于治疗前（P<0.05），两组间细菌总菌落数与牙龈卟啉单胞菌菌数变化无显著差异（P>0.05）。两组大鼠治疗后牙菌斑指数（PLI）、牙龈出血指数（SBI）显著低于治疗前（P<0.05），其中A组治疗后牙菌斑指数（PLI）、牙龈出血指数（SBI）减少程度明显优于B组（P<0.05）。结论：甲苯胺蓝介导的光动力疗法与羧甲基壳聚糖银治疗牙周病均有良好杀菌作用，然而光动力疗法牙周病能够更好控制牙菌斑生成，有效降低牙龈出血率发生，对牙周炎治疗有良好促进作用。

[关键词] 光动力；牙周炎；羧甲基壳聚糖银；牙菌斑

中图分类号：R332 文献标识码： B 文章编号：2095-5200（2015）05-058-03

牙周炎是口腔中发生率较高的常见疾病，牙菌斑为牙周炎主要致病因素。牙周炎临床治疗方法以洁治、刮治等机械疗法及应用抗菌药物控制细菌为主。机械疗法往往难以完全清除牙周袋内菌斑及预防病原菌再次感染，而治疗中创伤也可能引起菌血症。抗菌药物应用同样存在着许多问题，例如影响味觉，口腔干燥，药物过敏反应以及细菌耐药性等[1-2]。因此，探索一种能够克服上述不足的新型抗菌疗法至关重要。羧甲基壳聚糖银属于氯乙酸化经羧基与Ag+结合而成壳聚糖重金属螯合物，作为局部可吸收缓释药物CMCT Ag+对牙龈卟啉单胞菌有良好抑制作用[3]。光动力疗法是利用特定波长激光与光敏剂结合治疗牙周病的新型无创治疗方法，能够产生单态氧与诸多活性氧成分，破坏牙菌斑生物膜结构，对口腔致病菌具有灭活作用[4]。本研究对比甲苯胺蓝介导光动力疗法与羧甲基壳聚糖银治疗大鼠牙周炎疗效，具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品

SD大鼠（哈尔滨医科大学附属第四医院动物实验中心提供），实验前均于实验室内常规饲养3d。羧甲基壳聚糖银（由东北师范大学生化教研室提供） ，2%碱性品红溶液、1%戊巴比妥钠均购于自北京化学试剂厂。

1.2 大鼠牙周炎模型建立

大鼠称重后取1%戊巴比妥钠行腹腔注射麻醉，剂量为40mg/kg。在麻醉状态下用牙钻对上颌第一磨牙钻沟，并用0.3mm正畸钢丝进行结扎，结扎后将牙龈卟啉单胞菌均匀涂布至牙龈龈沟内，1次/d。6周后随机选择一只大鼠取磨牙龈下菌斑一份进行细菌培养，若培养皿中细菌菌落密集形成，肉眼可见磨牙牙龈红肿，探诊出血以及龈沟液溢增多与牙周袋形成，则牙周炎模型成功建立。

1.3 治疗方法

将20只成功建立牙周炎模型大鼠随机分为A、B两组，每组10只。两组大鼠均连续治疗1周。A组大鼠采用光动力疗法，甲苯胺蓝粉末溶于0.9%无菌生理盐水中，0.22μm微孔膜过滤，放置于避光环境中。采用最大输出功率为260mW光动力治疗仪，激光器中心波长为635nm。麻醉大鼠后取出结扎钢丝，取50μL光敏剂浸润上颌右侧第一磨牙，于黑暗中留置9min后将光纤放在磨牙颌骨中央进行照射，牙龈表面光强度212mW/cm2，光剂量48J/cm2，57s/次/d。B组大鼠采用羧甲基壳聚糖银（CMCT-Ag+）对大鼠上颌右侧第一磨牙进行牙面以及牙周涂布给药。2次/d，每次间隔12h。

1.4 观察指标

两组大鼠治疗前后接受标本采集，通过ImagePro-pus5.0对总菌落以及pg菌落数进行计数，比较两组治疗前后细菌菌落数，牙菌斑指数（PLI）以及龈沟出血指数（SBI）变化。

标本采集及厌氧培养：0.9%无菌生理盐水对患牙齿冲洗30s，用棉卷隔湿后，用无菌刮治器将龈上菌斑刮除，气枪吹干牙面，确立三个标本采集位点。用40号无菌纸尖插入龈沟底20s后取出，将标本置于装有1ML转送液离心管中，-20℃保存，2h内送至实验室，厌氧环境下培养6d。取黑色菌落，通过ImagePro-pus5.0对患牙细菌总菌落数及pg菌落数进行计数。

牙菌斑指数（PLI）检测：大鼠第一磨牙牙面均匀涂抹2%碱性品红溶液，反复用清水冲洗三次，观察牙龈表面紫红色处数量（牙菌斑位置），以Silness菌斑判断标准[5]为依据：0为无牙菌斑存在；1为有薄牙菌斑存在；2为有中等量牙菌斑存在；3为牙菌斑大量存在。观察记录后所得平均值即为大鼠（PLI）。

龈沟出血指数（SBI）检测：固定大鼠头部使其牙龈露出，将探针探入大鼠龈沟10s测定龈沟出血情况，以龈沟出血指数标准为依据：牙龈出血为阳性（5分）、牙龈未出血为阴性（0分）。

1.5 统计学方法

将研究所得数据录入SPSS19.0软件中进行统计学分析，计量资料比较采用t检验，并以（x±s）表示，若（P<0.05），则差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1 两组大鼠菌斑总菌落数以及pg菌落数对比

两组大鼠治疗前菌斑总菌落与pg菌落数相比差异无统计学意义（P>0.05），治疗1周后菌斑总菌落数以及pg菌落数均显著低于治疗前（P<0.05）。两组大鼠治疗后菌斑总菌落数与pg菌落数比较，差异无统计学意义（P>0.05），详见下表1。

2.2 两组大鼠治疗前后PLI、SBI比较

治疗前两组大鼠PLI、BI相比差异无统计学意义（P>0.05），治疗后PLI显著低于治疗前（P<0.05）。其中，A组治疗后PLI、SBI下降程度明显优于B组（P<0.05），详见下表2。

3 讨论

用羧甲基壳聚糖银进行抗菌治疗是临床上治疗牙周炎常用方法，羧甲基壳聚糖是一种含有活性羧基以及活性氨基壳聚糖衍生物，具有较强重金属螯合作用以及缓释成膜性[6-7]。能够与菌体表面N、O发生作用，并且在菌体周围产生活性氧破坏菌，将菌体表面活性结构破坏，从而产生杀菌效果。但是近年来有研究表明其治疗效果并不理想[8-9]。有报道采用甲苯胺蓝介导光动力疗法[10]，本研究以大鼠作为研究对象，比较光动力学疗法与羧甲基壳聚糖疗法效果。两组大鼠均治疗1周后，发现应用甲苯胺蓝介导光动力学疗法治疗的A组，牙菌斑指数和牙龈出血指数减少程度均明显优于使用羧甲基壳聚糖法进行治疗的B组，与文献报道一致[11-12]。研究表明，光动力学疗法能够有效杀灭多种口腔细菌，如放线杆菌、聚合酸杆菌、牙龈卟啉单胞菌以及中间普氏菌等。光动力学疗法可以在抑制菌斑生物膜形成，同时有效清除口腔中细菌菌群。在牙周袋深处，一些粗糙牙骨质表面和牙间隙等深在部位牙菌斑，用羧甲基壳聚糖进行治疗难以将菌斑完全清除，无法取得满意治疗效果。光动力学疗法应用激光照射原理能够轻易达到这些部位，破坏牙菌斑生物膜结构，杀灭口腔致病菌，从而取到良好治疗效果[13-14]。另一方面，甄静敏等[15]指出长期使用羧甲基壳聚糖治疗牙周炎，细菌虽然能够被部分清除，但部分细菌可能会产生耐药性，影响治疗效果。光动力学疗法是通过光敏反应产生单态氧对细菌进行清除，无创且不会引起细菌耐药性，能够在实际治疗过程中保持长时间治疗效果。

综上所述，甲苯胺蓝介导光动力疗法与羧甲基壳聚糖银治疗牙周病均有良好杀菌作用，然而光动力疗法牙周病能够更好控制牙菌斑生成，有效降低牙龈出血率发生，对牙周炎治疗有良好促进作用。

参 考 文 献

[1] 王妙妍，陈广盛，庄海燕，等.盐酸米诺环素缓释抗菌软膏修复牙周牙髓联合病变[J].中国组织工程研究，2014，（34）：5525-5529.

[2] 耿晓文，陈武，严道南，等.牙周炎局部药物治疗[J].辽宁中医药大学学报，2007，9（4）：31-34.

[3] 唐涛，薛毅，信玉华，等.羧甲基壳聚糖对口腔重要厌氧菌抑菌性能评价[J].中国微生态学杂志，2003，15（6）：337-337，339.

[4] Giusti JS， Santos-Pinto L， Pizzolito AC， Helmerson K， Carvalho-Filho E， Kurachi C， Bagnato VS （2008） Antimicrobial photodynamic action on dentin using a light-emitting diode light source[J]. Photomed Laser Surg 2008，26（4）：281-287.

[5] L?e H， Silness J. Periodontal disease in pregnancy. I. Prevalence and severity[J]. Acta Odontol Scand ，1963，21（1）：533-551.

[6] Shengling Sun，Aiqin Wang.Adsorption properties of carboxymethyl-chitosan and cross-linked carboxymethyl-chitosan resin with Cu（II）as template[J].Separation and Purification Technology，2006，49（3）：197-204.

[7] Garcia，V.G.，GualbertoJúnior，E.C.，Fernandes，L.A. et al.Adjunctive antimicrobial photodynamic treatment of experimentally induced periodontitis in rats with ovariectomy[J].Journal of Periodontology，2013，84（4）：556-565.

[8] Zhang， D.，Ren， L.，Zhang， Y. et al.Antibacterial activity against Porphyromonas gingivalis and biological characteristics of antibacterial stainless steel[J].Colloids and Surfaces. B， Biointerfaces，2013，105（3）：51-57.

[9] 曹文帅，邓婧，徐全臣，等.几种常见牙周致病菌对羧甲基壳聚糖降解效应[J].中国组织工程研究 ，2013，（34）：6152-6158.

[10] Atieh MA.Photodynamic therapy as an adjunctive treatment for chronic periodontitis： a meta-analysis.[J].Lasers in medical science，2010，25（4）：605-613.

[11] G ?kinci，S ?enel，H Ak?nc?bay，S Ka?，S Erci?，C.G Wilson，A.A H?ncal. Effect of chitosan on a periodontal pathogen Porphyromonas gingivalis[J]. International Journal of Pharmaceutics，2002，12（8）：2351-2356.

[12] Theodoro，L.H.，Silva，S.P.，Pires，J.R. et al.Clinical and microbiological effects of photodynamic therapy associated with nonsurgical periodontal treatment. A 6-month follow-up[J].Lasers in medical science，2012，27（4）：687-693.

[13] 陈宏宇.牙周炎研究进展[J].医学综述，2013，19（6）：1037-1039.

[14] De，Oliveira，RR，Schwartz-Filho，HO，Novaes，AB et al.Antimicrobial photodynamic therapy in the non-surgical treatment of aggressive periodontitis： cytokine profile in gingival crevicular fluid， preliminary results[J].Journal of Periodontology，2009，80（1）：98-105.

[15] 甄静敏，尹芝，翟晓雷，等.羧甲基壳聚糖治疗急性智齿冠周炎疗效观察[J].临床合理用药杂志，2014，（28）：18-18，20.