马鹏

[摘 要] 目的：探究T细胞亚群、炎性因子IL-32、IL-6等对乙型病毒肝炎的诊断及相关性。方法：随机选取我院收治的乙型肝炎患者138例为观察组，以同期健康体检人员32例为对照组，对所有受试者进行T细胞亚群比例、IL-32和IL-6水平的检测，并对肝功能相关指标进行检测，探究其相关性。结果：乙肝患者的CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，各组与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；乙型肝炎患者的IL-32和IL-6水平高于对照组，且急性乙肝组患者与轻度、中度和重度乙型肝炎组各组之间具有统计学差异（P<0.05）。而HBV DNA（+）组与HBV DNA（-）组在T细胞亚群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有统计学差异（P>0.05）。IL-32和IL-6水平与ALT、TB均呈正相关，与AlB水平呈负相关。结论：CD4+/CD8+比值及细胞因子IL-32和IL-6水平的变化直接影响乙型肝炎的发病，对乙型肝炎的诊断有一定指导意义；IL-32和IL-6水平与病毒复制无关，仅与机体免疫异常有关且与肝脏功能指标呈现一定相关性。

[关键词] T细胞亚群；IL-32；IL-6；乙型病毒肝炎

中图分类号：R575.1 文献标识码： B 文章编号：2095-5200（2015）05-034-04

[Abstract] Objective： To investigate T cell subsets， IL-32， IL-6 for the diagnosis and correlation of hepatitis B. Methods： 138 cases of hepatitis B patients in our hospital and 32 cases of healthy volunteers in the same period were randomly selected for the study， the former of which were regarded as the observation group and the latter were control group. T cell sub-population proportion， IL-32 and IL 6-level of all the subjects were observed， as well as the related indicators of liver function to explore the relevance. Results： For the patients with hepatitis B， the proportion of CD4 +T cells reduced ， CD8 +T cell ratio increased， and CD4 + / CD8 + ratio decreased in all groups compared with the control group， the difference of which statistically significant （P <0.05）； IL -32 and IL-6 levels of hepatitis B patients were higher than the control group， and there was a statistically significant difference （P <0.05） among the groups of patients with acute hepatitis， mild， moderate and severe hepatitis B group. The ratio of T cell subsets， IL-32，and IL-6 levels between the HBV HNA （+） group and HBV DNA （-） group were not statistically different （P> 0.05）. IL-32 and IL-6 levels were positively correlated with the level of ALT， TB，and negatively correlated with Alb level. Conclusions： CD4 + / CD8 + ratio and changes in cytokine IL-32 and IL-6 levels directly affect the incidence of hepatitis B， and are significant to the diagnosis of hepatitis B to some degree . IL-32 and IL-6 levels are independent of viral replication，and maybe be only related with immune abnormalities，which show some correlation with liver function indicators.

[Key words] T cell subsets； IL-32； IL-6； hepatitis B

乙型肝炎病毒（HBV）属于嗜肝双链DNA病毒，HBV并不会直接损害肝细胞，肝细胞损害及肝功能损害主要是由于细胞免疫在清除病毒过程中发挥作用而引起的 [1]。HBV引起的细胞免疫是体内一系列复杂的免疫应答过程，主要由T细胞介导，包括CD4+T和CD8+T细胞，正常情况下二者相互协调，比例维持正常水平，而CD4+/CD8+T细胞比值降低则是疾病严重和预后不良重要指标之一[2]。T细胞产生细胞因子具有广泛生物学活性，具有影响细胞增殖，调节T细胞分化及调节其亚型比例功能，IL-32能通过多种途径激活而促进炎性介质释放[3]，IL-6通过信号传导增强HBV活性，从而有助于HBV感染建立和发展[4]。现以本院收治138例乙型肝炎患者为研究对象，对T细胞亚群、IL-32、IL-6对乙型病毒肝炎诊断价值及相关性分析如下。

1 资料

1.1 一般资料

随机选取我院2012年8月至2014年2月收治乙型肝炎患者138例为观察组，男92例，女46例，年龄19～60岁，平均年龄（42.5±4.7）岁，均为汉族。其中急性乙型肝炎28例，慢性乙型肝炎110例，其中轻度40例，中度36例，重度34例。另外选取同期健康体检人员32例为对照组，其中男21例，女11例，年龄20～54岁，平均年龄（37.4±4.2）岁，均为汉族，排除HBV感染和肝功能异常者。急性乙型肝炎患者组和轻度、中度和重度慢性乙型肝炎观察组患者及对照组在性别、年龄等方面不具有统计学差异（P>0.05）。

另根据乙型肝炎患者外周血HBV病毒DNA是否为阳性，将138例乙型肝炎患者分为HBV DNA（+）组和HBV DNA（-）组，HBV DNA（+）组患者共91例，男61例，女30例，HBV DNA（-）组患者共47例，男31例，女16例，两组患者与对照组患者在性别、年龄方面不具有统计学差异（P>0.05）。

1.2 病例标准

入选标准：（1）所有患者诊断均符合《病毒性肝炎防治方案》[5]诊断标准；（2）患者未接收过抗病毒和免疫调节治疗；（3）患者在6个月内未接受保肝治疗；（4）同意并签署知情同意书。排除标准：（1）排除HAV、HCV、HDV和HEV感染；（2）排除脂肪肝、酒精性肝炎和自身免疫性肝炎等其他类型肝炎；（3）排除恶性肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病和其他感染性疾病。

2 方法

2.1 研究方法

以EDTA管抽取观察组和对照组受试者空腹外周静脉血10mL，检测项目包括常规肝功能指标：HBV血清标志物，谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）、白蛋白（ALB），HBV DNA和细胞因子IL-32、IL-6等。

2.2 检测方法

采用流式细胞仪（购自美国BD公司）测定外周T淋巴细胞表面标志物，采用ELASA法检测ALT、TB、ALB和IL-32、IL-6（试剂盒购自Groundwork Biotechnology），以酶标仪（购自BioTek Instruments，Inc）读取吸光度值，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

2.3 统计学方法

对采集到数据采用SPSS 19.0软件进行统计学处理，计量数据以（x±s）表示，组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK检验，相关性分析采用直线相关分析，以P<0.05具有统计学意义。

3 结果

3.1 乙型肝炎组与对照组检测结果对比

138例乙肝患者CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，乙肝各组与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。急性乙肝组患者与轻度、中度和重度乙型肝炎组患者CD4+T细胞比例，CD8+T细胞比例和CD4+/CD8+比值差异不具有统计学差异（P>0.05）。乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于对照组，且急性肝炎组患者与轻度、中度和重度乙型肝炎组各组之间IL-32和IL-6水平具有统计学差异（P<0.05）。具体如表1。

3.2 HBV HNA（+）组与HBV DNA（-）组检测结果对比

HBV HNA（+）组与HBV DNA（-）组T细胞亚群测定结果与细胞因子IL-32、IL-6检测结果如表2。HBV HNA（+）组和HBV DNA（-）组患者CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，且IL-32、IL-6水平均升高，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。而HBV HNA（+）组与HBV DNA（-）组在T细胞亚群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有统计学差异（P>0.05）。

对血清IL-32和IL-6水平与肝功能各指标进行直线相关性分析表明，乙肝患者血清IL-32水平与ALT、TB水平正相关（r=0.56、r=0.72），与AlB负相关（r=-0.43）；血清IL-6水平与ALT、TB水平正相关（r=.66，r=0.44），与Alb负相关（r=-0.41）。

4 讨论

人体感染HBV后病情和转归情况受到宿主和病毒两方面影响，其中发挥重要作用是宿主免疫功能[6]。人体免疫功能主要由细胞免疫和体液免疫来实现，细胞免疫是以T细胞为主而发挥功能，因此研究外周血T细胞亚群及其比例变化能很好反映机体免疫功能变化[7]。细胞免疫除了T细胞亚群比例有关之外，T细胞是否能充分活化与细胞因子参与有关，因此细胞因子在免疫应答调节中也发挥重要作用。

外周T细胞中CD4+T细胞，主要为Th细胞，CD4+T减少不仅使杀伤细胞激活，同时导致Th1/Th2细胞比例失衡，细胞因子紊乱而使病毒长期存在[8]。CD8+T细胞主要包括杀伤性T细胞（Tc细胞）和抑制性T细胞（Ts细胞），Tc细胞在HBV清除过程起主要作用，这也是HBV感染后引起肝细胞损伤主要原因；Ts细胞靶细胞为CD4+T细胞，可起到抑制免疫应答作用，因此CD8+T功能障碍将导致机体持续被病毒感染[9]。正常情况下，CD4+T和CD8+细胞保持一定比例，维持机体免疫功能。感染HBV时，肝脏发生炎症，从而导致单核巨嗜细胞产生IL-6，IL-6水平增高诱导毒性T细胞增殖分化，产生肝脏炎症[10]。研究发现，IL-32具有调节NK细胞功能，促进炎性介质释放等功能，同时IL-6可由IL-32诱导产生[11]。

该研究结果发现，乙型肝炎患者CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05），这可能与外周血Ts细胞增多有关，导致CD8+T细胞增多，同时抑制CD4+Th细胞免疫应答，因此乙肝患者不能有效清除HBV。不同程度乙型肝炎患者，HBV DNA（+）与HBV DNA（-）患者之间CD4+/CD8+比值之间不具有统计学差异（P>0.05）。说明HBV DNA复制不影响T细胞亚群比例，对乙肝患者细胞免疫功能影响较小，这与满昌军等[12]研究结果一致。

数据显示，乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于对照组，且急性肝炎组患者与轻度、中度和重度乙型肝炎组各组之间在IL-32和IL-6水平具有统计学差异（P<0.05）。由于不同程度乙肝患者免疫功能不同，分泌IL-32和IL-6能力也不同，这正是造成不同程度乙肝患者外周血内IL-32和IL-6水平差异较大原因所在。重度乙型肝炎患者免疫功能紊乱，导致IL-32不能正常调节NK细胞功能，也不能诱导单核细胞向巨噬细胞分化，同时IL-32促进其他炎性介质释放[13]；而乙型肝炎患者存在大量单核巨噬细胞浸润，引起肝脏炎症，诱发单核巨嗜细胞长生大量IL-6[14-15]，故IL-32和IL-6水平均升高较多。HBV DNA（+）与HBV DNA（-）患者之间IL-32、IL-6水平差异不具有统计学意义（P>0.05），说明IL-32和IL-6水平与HBV病毒复制无关，也说明HBV并不直接引起感染细胞病变。

由于HBV对肝细胞及肝功能造成损伤，血清中细胞因子水平与肝功能各项目呈现一定相关性。IL-32对IL-6、TNF-ɑ释放有促进作用，介导免疫损伤，因此会加重肝脏炎症反应，IL-32和IL-6水平与ALT、TB均呈正相关，与Alb水平呈负相关。HBV感染人体后对肝脏功能造成损伤主要与T细胞亚群及其细胞因子引起免疫应答有关。T细胞亚群CD4+T细胞比例，CD4+/CD8+比值及细胞因子IL-32和IL-6水平变化直接影响乙型肝炎发病，甚至IL-32和IL-6水平影响乙型肝炎发病程度，对乙型肝炎诊断有一定指导意义。值得注意是IL-32和IL-6水平与病毒复制无关，仅与机体免疫异常有关；且与肝脏功能有关指标呈现一定相关性。

参 考 文 献

[1] 王煜，闫跃武，王海燕，等.乙肝病毒大蛋白在慢性乙型肝炎中检测临床意义[J].宁夏医科大学学报，2012， 34（10）：1005.

[2] Raziorrouh B，Schraut W，Gerlach T，et al.The immunoregulatory role of CD244 in chronic hepatitis B infection and its inhibitory potential on virus specific CD8+ T-cell function[J].Hepatology，2010，52（6）：1934.

[3] Abu-Mouch S，Fireman Z，Jarchovsky J，et al. Vitamin D supplementation improves sustained virologic response in chronic hepatitis C（genotype 1）-na ve patients[J]. World J Gastroenterol，2011（25）：17-19.

[4] Harada K，Shimoda S，Sato Y，et al. Periductal interleukin- 17 production In association with biliary innate immunity contributes to thepathogenesis of cholangiopathy in primary biliary cirrhosis[J]. Clin Exp Immuno1，2009，157（2）： 261-270.

[5] Kang KY，Kim HO，Kwtk SK，et al. Impact of interleukin-21 in the pathogenesis of primary Sjogren's syndrome： increased serum levels of interleukin-21 and its expression in the labial salivary glands[J]. Arthritis Res Ther，2011，13（5） ： 179.

[6] 谢琳琳，李文玉. 拉米夫定和阿德福韦酯联用与恩替卡韦单药初治慢性乙型肝炎疗效对比 [J].现代仪器与医疗，2014，20（5）：91-92.

[7] Kitagishi Y，Kobayashi M，Yamshina Y， et al.Elucidating the regulation of T cell subsets（review）[J].Int j Mol Med，2012，30（6）：1255.

[8] Bemark M， Holmqvist J， Abrahamsson J， et al. Translational Mini-Review Series on B cell subsets in disease. Reconstitution after haematopoietic cell transplantation-revelation of B cell developmental pathways and linege phenotypes [J].Clin Exp Immunol， 2012， 167（1）： 15-16.

[9] 朱礼尧，周建，朱农，等. HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA病毒载量与ALT水平相关性探讨 [J]. 现代仪器与医疗，2013，19（2）：45-47.

[10] Rasool ST， Tang H， Wu J， et al. Increased level of IL-32 during human immunodeficiency virus infection suppresses HIV replication[J]. Immunol lett， 2008， 117（2）：161-167.

[11] 王晓辉，杨尧，雷学忠，等.慢性乙型肝炎患者病情分度与外周血T淋巴细胞亚群关系[J].四川医药，2005，26：1087-1088.

[12] 满昌军，董香玉.外周血T细胞亚群、IL-32、IL-6水平在乙型肝炎患者表达及相关性分析[J].中国实验诊断学，2014，18（1）：62-64.

[13] 左维泽，许春梅，沈兰超.乙型肝炎患者血清白细胞介素-32、白细胞介素-6水平变化及临床意义[J].临床肝胆病杂志，2011，27（4）：408-410.

[14] Xiang WQ， Feng WF， Ke W， et al. Hepatis B virus protein stimulates IL-6 expression in hepatocytes via MyD88-dependent pathway[J].J Hepatol， 2011， 54（1）： 26-27.

[15] EI Husseiny NM，Fahmy HM，Mohamed WA，et al. Relationship between vitamin D and IL-23，IL-17 and macrophage chemoattractant protein-1 as markers of fibrosis in hepatitis C virus Egyptian[J]. World J Hepatol，2012，4（8）：242-247.