王亿平，　唐锦囊，　王 东，　茅燕萍，　金 华，　王立媛

（安徽中医药大学第一附属医院，安徽　合肥　230031）

参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者血清MMP-9/TIMP-1的干预作用

王亿平，唐锦囊，王 东，茅燕萍，金 华，王立媛

（安徽中医药大学第一附属医院，安徽合肥230031）

目的 观察参地颗粒（人参，茯苓，熟地黄，五味子，桑螵蛸，川芎）对慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）/金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的干预作用。方法 64例慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者随机分为对照组（31例）和治疗组（33例），另选取20名健康体检者作为正常组。对照组服用贝那普利片，治疗组服用参地颗粒，疗程8周。检测临床疗效、治疗前后24 h尿蛋白定量及血清MMP-9/TIMP-1的水平。结果治疗组临床疾病总有效率和中医证候疗效总有效率分别为87.88%和90.91%，优于对照组的74.19%和67.74%（P＜0.05）。治疗组和对照组患者治疗前的血清MMP-9、TIMP-1水平均显著高于正常组，而MMP-9/TIMP-1显著低于正常组（P＜0.05），治疗后两组血清MMP-9水平较治疗前均有显著升高，治疗组的血清TIMP-1水平较治疗前显著降低，MMP-9/TIMP-1较治疗前显著升高（P＜0.05），而对照组的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治疗前后变化不显著（P＞0.05）。两组治疗后24 h尿蛋白定量较治疗前显著降低，且治疗组的下降幅度大于对照组（P＜0.05）。结论 参地颗粒可以有效改善脾肾亏虚证患者临床症状，减少尿蛋白定量，其机理可能与调节血清MMP-9和TIMP-1水平有关。

慢性肾炎；脾肾亏虚证；基质金属蛋白酶-9；金属蛋白酶组织抑制剂-1；参地颗粒

慢性肾小球肾炎（chronic g1omeru1onephritis，CGN）简称慢性肾炎，是我国导致慢性肾衰竭（chronic rena1 fai1ure，CRF）的首位病因，蛋白尿是慢性肾小球肾炎病情进展的独立危险因素，降低蛋白尿对于阻止或延缓慢性肾小球肾炎的病程进展具有重要意义［1-2］。有证据显示，肾小球内血清基质金属蛋白酶（MMPs）/组织金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）比值失衡是导致细胞外基质（extrace11u1armatrix，ECM）过度表达与沉积、肾小球硬化的重要因素［3-4］。本研究探讨慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）水平变化及参地颗粒对其干预作用。

1　材料与方法

1.1病例选择标准

1.1.1西医诊断标准 参照第7版《内科学》的诊断标准［5］。

1.1.2中医辨证标准 参照《中药新药临床研究指导原则》［6］制定。主症：神疲乏力，腰酸背痛，纳呆，浮肿，胃脘不适。次症：大便溏泄，小便频数，夜尿增多，舌淡边有齿痕，脉沉细。具备主症大于3项，或主症2项、次症大于2项者，辨证为脾肾亏虚。

1.1.3中医症状量化评分标准 参照《中药新药临床研究指导原则》［6］的标准，分轻度、中度、重度，分别计2分、4分、6分。

1.1.4病例纳入标准 ①符合慢性肾小球肾炎西医诊断标准和中医脾肾亏虚证辨证标准；②慢性肾脏病Ⅰ期或Ⅱ期；③24 h尿蛋白定量小于3 g；④年龄在18～65岁之间；⑤自愿参加临床试验，并签署知情同意书。

1.1.5病例排除标准 ①不符合纳入病例标准；②口服细胞毒类药物或糖皮质激素；③已妊娠或哺乳的妇女；④合并严重的肝、心、脑等脏器的原发性疾病者；⑤不按常规服药，影响疗效判定的。

1.2研究对象及分组 70例慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者皆为我科2012年1月—2012年12月住院或门诊病人，按其入院先后顺序随机分为治疗组和对照组各35例，治疗过程中失访病例6例（治疗组2例，对照组4例），最后实际完成病例64例（治疗组33例，对照组31例）。治疗组男15例，女18例，年龄17～64岁，平均（35.97±12.03）岁，病程6个月～5.2年，平均（2.72±1.25）年，其中合并血压升高22例。对照组男17例，女14例，年龄18～63岁，平均（36.23±12.60）岁，病程4个月～4.5年，平均（2.82±1.16）

年，其中合并血压升高24例。两组患者基本情况经统计学处理无差别（P＞0.05），具有可比性。另选取20例同期来我院体检正常者作为正常对照组，检测其血清MMP-9和血清TIMP-1的水平。

1.3治疗方法 治疗组口服参地颗粒（院内制剂，安徽中医药大学第一附属医院研制），每次1袋（10 g，含生药34 g），每日3次，温水冲服。对照组服用贝那普利片（北京诺华制药有限公司生产，国药准字H20030514），每次10 mg，每日1次，两组疗程均为8周。对合并症的治疗注意保持合并用药种类与剂量的均衡，不使用血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）、利尿剂等对疗效判定可能产生影响的药物。

1.4观察指标 治疗前后患者24 h尿蛋白定量、中医证候积分以及血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP变化情况，并与正常组比较，采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，主要试剂MMP-9及TIMP-1均来源于上海源叶生物技术有限公司，批号分别为H34376、H32667。

1.5疗效判定标准 依据《中药新药临床研究指导原则》制定标准判定［6］。临床疗效判定分临床控制、显效、有效和无效。中医证候疗效判定标准分为临床痊愈、显效、有效和无效。

1.6统计学处理 采用SPSS 17.0软件包进行数据处理。计量资料用均数±标准差（±s）表示，治疗前后采用配对t检验，组间比较采用独立样本t检验和单因素方差分析，等级资料采用秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＞0.05为差异无统计学意义。

2　结果

2.1两组患者临床疾病疗效比较 治疗组临床疾病总有效率为87.88%，优于对照组74.19%，两组临床疾病疗效有显著性差异（P＜0.05）。见表1。

表1　两组患者临床疾病疗效比较［例（%）］Tab.1 Com parison of therapeutic effect between the two groups［n（%）］

2.2两组患者中医证候疗效比较 治疗组中医证候总有效率90.91%，优于对照组67.74%，两组中医证候疗效有显著性差异（P＜0.05）。见表2。

表2　两组患者中医证候疗效比较［例（%）］Tab.2 Comparison of TCM syndrome regu Iation between the two groups［n（%）］

2.3各组患者治疗前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP水平比较 治疗组和对照组患者治疗前的血清MMP-9、TIMP-1水平均显著高于正常组，而MMP-9/TIMP-1显著低于正常组（P＜0.05），治疗后两组血清MMP-9水平较治疗前均有显著升高，治疗组的血清TIMP-1水平较治疗前显著降低，MMP-9/TIMP-1较治疗前显著升高（P＜0.05），而对照组的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治疗前后变化不显著（P＞0.05）。见表3。

表3　各组患者治疗前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比较（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

表3　各组患者治疗前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比较（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

注：与正常组比较，▲P＜0.05；与同期对照组比较，△P＜0.05；与本组治疗前比较，*P＜0.05

组别例数MMP-9/（ng·mL-1）治疗前治疗后TIMP-1/（ng·m L-1）治疗前治疗后（MMP-9/TIMP）治疗前治疗后正常组20 18.98±12.94——58.74±3.68——0.91±0.19——对照组31 52.63±12.56▲61.07±11.72*121.65±7.98▲125.12±7.08 0.52±0.15 0.53±0.12治疗组33 54.52±10.59▲85.86±10.71△**118.83±5.84▲96.09±8.03△*0.48±0.12▲0.88±0.11△*

2.4两组患者治疗前后24 h尿蛋白定量比较 治疗组和对照组的24 h尿蛋白定量在治疗4周后与治疗前相比有显著降低，治疗8周后降低更为显著；且治疗组8周后的24 h尿蛋白定量较同期对照组相比降低更为显著（P＜0.05）。见表4。

表4　两组患者治疗前后24 h尿蛋白定量比较（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

表4　两组患者治疗前后24 h尿蛋白定量比较（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

注：与同期对照组比较，△P＜0.05；与本组治疗前比较，#P＜0.05

组别例数治疗前治疗后4周治疗后8周对照组31 1.77±0.63 1.50±0.62#1.26±0.54#治疗组33 1.71±0.47 1.35±0.42#1.02±0.38△#

2.5两组患者治疗前后BUN、Scr、eGFR水平比较 治疗组和对照组治疗前BUN、Scr、eGFR水平无统计学意义（P＞0.05），治疗后BUN、Scr、eGFR水平与治疗前比较无统计学意义（P＞0.05）。见表5。

3　讨论

慢性肾小球肾炎的病变部位主要在脾肾两脏，基本病机为脾肾亏虚，蛋白尿的生成与脾肾两脏虚损密不可分。我们在继承新安医学理论基础上不断进行科学实践，发现清朝新安医学名医程林删定的《圣济总录纂要·卷十三·虚劳门》所载人参汤秉承新安医学“立法重温补，着眼在肾”的学术特点，在健脾益肾的同时，不忘固摄精微，与我们认为慢性肾小球肾炎病机特点为脾肾亏虚、精微下注，治疗重在健脾益肾、固摄精微的观点一致。在此理论指导下，将人参汤制成参地颗粒，并成功应用于临床治疗慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者，取得良好的临床疗效［7-9］。参地颗粒以人参为君药，大补元气、固摄精微；臣药为茯苓、熟地黄，健脾益肾；五味子、桑螵蛸为佐药，固摄精微；川芎亦为佐药活血化瘀。诸药合用，起到健脾益肾、固摄精微的功效。

表5　两组患者治疗前后BUN、Scr、eGFR水平比较（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

表5　两组患者治疗前后BUN、Scr、eGFR水平比较（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

注：与同期对照组比较，△P＞0.05；与本组治疗前比较，△P＞0.05

组别例数BUN/（mmo1·mL-1）治疗前治疗后Scr/（μmo1·L-1）治疗前治疗后eGFR（mL·min-1）治疗前治疗后对照组31 5.51±0.98 5.12±1.08 82.63±12.56 80.07±11.72 78.32±6.82 76.45±7.51治疗组33 5.09±1.84△4.83±1.03△83.52±10.59△82.86±10.71△76.84±6.51△77.49±6.42△

MMPs和TIMPs的调节对维持肾小球细胞外基质（ECM）生成和降解的内环境稳态至关重要［3］。MMP-9是明胶酶类中的一种，可以降解多种基质成分，属于MMPs家族中重要成员之一。明胶酶是迄今为止发现在肾脏中水解活性最强的基质金属蛋白酶，它直接参与肾脏发育、细胞浸润、肾小球硬化和间质纤维化等多种病理过程［10-11］。TIMP-1作为TIMP家族中的一员，可以抑制MMP-9活性，在ECM的沉积降解平衡中起关键作用。TIMP-1通过抑制ECM的降解过程导致ECM积聚，在许多肾脏纤维化疾病中其表达显著增高，因此可以认为TIMP-1是参与肾小球硬化及间质纤维化的主要降解酶［12］。多种肾小球肾炎模型及临床研究发现，肾组织TIMP-1比正常对照组升高，提示TIMP-1增多参与了ECM成分的积聚［13］。有研究表明［13-14］TIMP-1在肾衰竭组、IgA肾病Lee分级重度病理改变组及中度病理改变组血清中水平较正常组明显增高，且随病变加重其水平呈递增趋势，提示随着系膜基质及系膜细胞的增多、疾病活动程度的加重，TIMP-1在血清中的水平相应增加。MMPs与TIMPs之间平衡失调，如MMP-9/TIMP-1比值降低，提示降解ECM能力减弱，将导致ECM增殖和肾小球硬化［15-16］。

本研究结果发现，慢性肾小球肾炎脾肾亏虚证患者血清MMP-9、TIMP-1水平显著升高，MMP-9/ TIMP-1比值显著降低，提示ECM降解能力下降、合成能力增加。参地颗粒可有效改善脾肾亏虚证患者临床症状，减少尿蛋白定量，其机理可能与显著提升患者血清MMP-9水平，降低血清TIMP-1水平，从而显著升高MMP-9/TIMP-1比值，促进ECM降解，降低肾脏ECM水平有关。

［1］Ding S Y，Zheng P D，He L Q，et al.The research on xiaochaihu decoction improving the inf1ammation of chronic g1omeru1onephritis patients and re1ieving the proteinuria［J］.Chin J Integr Tradit Chin WestMed，2013，33（1）：21-26.

［2］Qiu H，Fu P，Fan W，et al.Treatment of primary chronic g1omeru1onephritiswith rehmannia g1utinosa acteosides in combination with the Angiotensin receptor b1ocker irbesartan：a randomized contro11ed tria1［J］.Phytother Res，2014，28（1）：132-136.

［3］Hu P，Wang J，Zhao X Q，et al.Overexpressed C-type natriuretic peptide serves as an ear1y compensatory response to counteract extrace11u1ar matrix remode1ing in uni1atera1 uretera1 obstruction rats［J］.Mol Biol Rep，2013，40（2）：1429-1441.

［4］李小会，赵明君，雷根平，等.通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响［J］.中成药，2013，35（1）：11-14.

［5］陆再英，钟南山.内科学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2007：508-511.

［6］郑筱萸.中药新药临床研究指导原则（试行）［M］.北京：中国医药科技出版社，2002：157-160.

［7］茅燕萍，王亿平，牛 婧，等.参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者血清肝细胞生长因子和转化生长因子-β1的影响［J］.新中医，2012，44（5）：46-48.

［8］王亿平，史良平，王 东，等.参地颗粒治疗慢性肾炎脾肾亏虚证临床研究［J］.安徽中医学院学报，2011，30（4）：17-20.

［9］王亿平，王 东，吕 勇，等.人参汤治疗慢性肾炎脾肾亏虚证临床研究［C］//第二届（第21次）中华中医药学会肾病分会学术会议论文集.2008.

［10］Zhao H，Dong Y，Tian X，etal.Matrixmeta11oproteinases contribute to kidney fibrosis in chronic kidney diseases［J］.World JNephrol，2013，2（3）：84-89.

［11］倪 晨，王贵均，王 倩，等.中药对肾小球硬化大鼠MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA表达的影响［J］.环球中医药，2011，4（3）：193-196.

［12］Peng L，Yang J，Ning C，et al.Rhein inhibits integrin-1inked kinase expression and regu1ates matrix meta11oproteinase-9/tissue inhibitor ofmeta11oproteinase-1 ratio in high g1ucose-induced epithe1ia1-mesenchyma1 transition of rena1 tubu1ar ce11［J］.Biol Pharm Bull，2012，35（10）：1676-1685.

［13］张晓速，王 颖，常玲玲.TIMP-1水平在IgA肾病患者血清中的变化及意义［J］.中国中医药现代远程教育，2010，8（23）：163-164.

［14］师锁柱，张雪光，陈香美.MMP-9/IgA和TIMP-1/IgA在IgA肾病患者肾组织中的共表达及意义［J］.军医进修学院学报，2011，32（12）：1269-1273.

［15］Fu W，Wang Y，Jin Z，et al.Losartan a11eviates rena1 fibrosis by down-regu1ating HIF-1αand up-regu1ating MMP-9/TIMP-1 in ratswith 5/6 nephrectomy［J］.Ren Fail，2012，34（10）：1297-1304.

［16］Okada R，Kawai S，Naito M，et al.Matrixmeta11oproteinase-9 gene po1ymorphisms and chronic kidney disease［J］.Am J Nephrol，2012，36（5）：444-450.

Effect of Shendi Granu Ies on MMP-9/TIMP-1 in patientsw ith chronic gIomeru-Ionephritis of sp Ieen-kidney deficiency pattern

WANG Yi-ping， TANG Jin-nang， WANG Dong， MAO Yan-pin， JIN Hua， WAN Li-yuan
（The First Hospital Affiliated to Anhui University of TCM，Hefei230031，China）

chronic g1omeru1onephritis；sp1een-kidney deficiency pattern；matrixmeta11oproteinase-9（MMP-9）；tissue inhibitor ofmeta11oproteinase-1（TIMP-1）；Shendi Granu1es

R287

A

1001-1528（2015）01-0054-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.011

2014-01-12

安徽省高等学校省级自然科学研究项目（KJ2010A217）

王亿平（1963—），男，教授，主任医师，主要从事中西医结合治疗肾脏病的研究。Te1：（0551）62850072，E-mai1：Wypwyp54@a1iyun.com