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秦皮薄层鉴别方法的改进△

2015-09-25姜巧方王小平白吉庆

中国现代中药 2015年3期
关键词:乙素三氯甲烷薄层

姜巧方,王小平,白吉庆

(陕西中医学院,陕西 咸阳 712046)

·基础研究·

秦皮薄层鉴别方法的改进△

姜巧方,王小平,白吉庆*

(陕西中医学院,陕西 咸阳 712046)

目的:对秦皮薄层鉴别的展开系统进行改进。方法:改进了原标准的展开系统,采用硅胶G板,以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)为展开剂,置紫外光灯(365 nm)下检视秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素。结果:在供试品色谱中,秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素斑点清晰,分离度好,重现性好。结论:该方法的展开系统减少了对环境的污染和对人体的伤害,可替代原标准用于秦皮的鉴别。

秦皮;薄层鉴别;秦皮甲素;秦皮乙素;秦皮素

秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树FraxinusrhynchophyllaHance、白蜡树FraxinuschinensisRoxb.、尖叶白蜡树FraxinusszaboanaLingelsh.或宿柱白蜡树Fraxinusstylosalingelsh.的干燥枝皮或干皮[1]。秦皮具有清热燥湿,收涩止痢,止带,明目之功能,用于治疗热痢,泄泻,赤白带下,目赤肿痛等症[2-3]。研究表明,秦皮具有抗炎、止痛、抗氧化和降低血尿酸等功能,治疗痛风效果极佳[3-4]。秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素是秦皮的主要有效成分,具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等作用[5-6]。《中华人民共和国药典》2010年版一部中以秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素3种成分作为秦皮定性鉴别的标识成分,采用硅胶G薄层色谱法,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)为展开剂,对秦皮进行鉴别,但由于展开剂中使用了毒性较大的三氯甲烷,对环境和人体有一定的危害[7]。本试验对秦皮薄层色谱鉴别的展开系统进行了改进,用二氯甲烷替代三氯甲烷,以减少对人体的危害和对环境的污染。通过研究,建立了一种较为理想的薄层鉴别展开系统,样品中所鉴别的成分斑点清晰,分离度好,重现性好。该方法可以替代原标准用于秦皮的鉴别。

1 仪器与材料

1.1 仪器

200 g多功能粉碎机(上海树立仪表有限公司);BT125D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司,d=0.1 mg;d=0.01 mg);2F-90多功能暗箱式紫外透射仪(上海宝山顾材电光仪器厂);HH-2A型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)。

1.2 试药

秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品、秦皮素对照品(中国食品药品检定研究院,批号分别为0740-200104,110741-200506,111731-200501);甲酸、甲醇、三氯甲烷等均为分析纯;秦皮药材经陕西中医学院白吉庆副教授鉴定为苦枥白蜡树FraxinusrhynchophyllaHance、白蜡树FraxinuschinensisRoxb.的干燥枝皮或干皮。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 供试品溶液的制备 取秦皮粉末1 g,置圆底烧瓶中,加入甲醇10 mL,置水浴加热回流10 min,取出,放冷,滤过,滤液置蒸发皿中,于水浴上挥干,残渣加入5 mL甲醇溶解,即得供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素对照品适量,置于量瓶中,分别加甲醇溶解,并以甲醇稀释至刻度,制成质量浓度分别为0.115、0.98、0.18 mg·mL-1的溶液,作为对照品溶液

2.2 结果

2.2.1 改进方法 吸取上述3种对照品溶液各2 μL和供试品溶液4 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)为展开剂,展开,取出,晾干。置于紫外光灯(365 nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,结果见图1。

注:1、2、6、7:秦皮供试品;3.秦皮甲素对照品;4.秦皮乙素对照品;5.秦皮素对照品。下同。图1 秦皮薄层色谱鉴别(改进方法)

2.2.2 原方法 照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录薄层色谱法试验[8],吸取上述3种对照品溶液各2 μL和供试品溶液4 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)为展开剂,展开,取出,晾干。置于紫外光灯(365 nm)下检视,在供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,结果见图2。

图2 秦皮薄层色谱鉴别(2010版药典方法)

3 讨论

温度和湿度也是薄层色谱鉴别的影响因素,本试验对展开环境的温度进行考察,结果在15~25 ℃,供试品色谱中主要斑点的分离度较好。同时对展开环境的相对湿度进行考察,分别考察了相对湿度为20%、30%、60%、75%,结果在20%~60%,供试品色谱中主要斑点的分离度较好。

本试验对不同来源的秦皮和同一来源不同产地的秦皮,用改进后展开系统进行了鉴别,结果显示,均能鉴别出秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素,只是不同基源、不同产地的秦皮中,秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素斑点的大小和颜色的深浅略有不同,说明基源和产地对秦皮中的主要成分秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的含量有一定的影响。

原标准秦皮薄层鉴别中使用三氯甲烷为展开剂的主要组分,该试剂毒性较大。而本试验通过研究用毒性较小的二氯甲烷代替三氯甲烷,不仅不会影响秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的鉴别,而且还会减少对人体的危害和对环境的污染。采用改进后的TLC 鉴别方法鉴别秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素,方法简单,专属性强,重复性好,可替代原标准用于秦皮的鉴别。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:254.

[2] 付珊.秦皮质量控制方法研究[D].石家庄:河北医科大学,2014.

[3] 张林,张梦琪,傅延龄.秦皮历代临床用量分析[J].中药材,2014,55(22):1957-1960.

[4] 翁远超,刘静雯,崔璨.秦皮中化学成分的分离鉴定及其体外抑菌活性[J].西北国防医学杂志,2012,24(1):40-47.

[5] 刘爽,谢鲲鹏,邹丹.秦皮素对大肠埃希菌作用机制的初步研究[J].中国微生态学杂志,2014,26(10):1123-1126.

[6] 向小四.秦皮甲素提取纯化工艺及降尿酸作用研究[D].长沙:中南大学.2013.

[7] 王海兰.三氯甲烷的职业危害与防护[J].现代职业安全,2014,(5):110-112.

[8] 罗进斌,林惠芬,黄方取.一起急性三氯甲烷中毒事故的调查[J].环境与职业医学,2014,31(6):462-466.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录34-35.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFraxiniCortex

JIANGQiaofang,WANGXiaoping,BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM,Xianyang712046,Shaanxi,China)

Objective:To improve the TLC identification method of Fraxini CortexMethods:TLC developing system of the original quality standard was improved.Using silica gel G thin layer plate,aesculin,aesculetin and fraxetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(7∶>0.5∶>0.5),and detected under the uv lamp(365 nm).Results:In the chromatogram,the spots of aesculin,aesculetin and fraxetin were clear.The method was repeatable.Conclusion:The method is simple and environment friendly,could replace the original standard to identify Fraxini Cortex.

Fraxini Cortex;TLC;aesculin;aesculetin;fraxetin

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.008

2015-01-28)

陕西省中医药管理局科研项目(13-ZY049)

*

白吉庆,副教授,硕士生导师,研究方向:中药资源开发与利用;Email:baijiqing323@126.com

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