王永仓 许戈良 赵旭辉 魏 忠 樊 平 戴 寅 谢 钊 刘巧玉

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的原发性肝癌，是我国高发、危害极大的恶性肿瘤，目前确切的病因还不明确，多认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程［1］。雌激素对肝癌有抑制作用［2，3］，雌激素对肝癌生成有保护作用，其机制可能与雌激素减少肿瘤微环境中炎症因子的释放有关［4，5］。我院进一步研究雌激素对大鼠肝癌模型中肝癌肺转移形成的影响及其可能的机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料SPF 级雌性SD 大鼠160 只，周龄5 ～6周，体质量120 ～160 g，由安徽省立医院动物实验中心饲养。将大鼠随机分为4 组:对照组、切除卵巢组、假手术组和去卵巢后加雌激素组［给予30 μg/(kg·d)17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol，17α-EE2)］。二乙基亚硝胺、N-亚硝基吗啉、17α-EE2 购自美国Sigma 公司。大鼠雌二醇(estradiol，E2)、17α-EE2、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、白介素6(interleukin-6，IL-6)酶联免疫吸附法试剂盒购自美国R＆D 公司，雌激素受体α(extrogen receptor α，ERα)、磷酸化雌激素受体α(phospho-estrogen receptor alpha，P-ERα)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)和IL-6单克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司，逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)引物由上海生工生物工程公司合成。

1.2 方法

1.2.1 造模 对切除卵巢组、假手术组和去卵巢后加雌激素组进行手术处理，去卵巢后加雌激素组在术后第2 天即给予17α-EE2 直到实验结束，剂量为30 μg/(kg·d)。诱癌方法参照本课题组研究方法［6］。

1.2.2 实验终点 诱癌20 周后集中处死所有大鼠，观察各组大鼠肝癌及肺转移发生情况。标本经甲醛固定、石蜡包埋后染色并镜下观察。

1.2.3 免疫组织化学 染色采用免疫组织化学SP 法检测各组成瘤大鼠肝癌组织中ERα、P-ERα、HGF 和IL-6 的表达［7］。

1.2.4 RT-PCR 取各组新鲜肝癌组织，用Trizol 试剂(购自美国Promage 公司)提取组织及细胞中总RNA，操作步骤按说明书进行。……