黄志立，张丽君，伍丽华，王　妍，杨汝德

(1.深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院，广东 深圳 518055；2.华南理工大学生物科学与工程学院，广东 广州 510640)

RNA干扰血管紧张素原基因表达对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响

黄志立1，张丽君1，伍丽华2，王妍1，杨汝德2

(1.深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院，广东 深圳 518055；2.华南理工大学生物科学与工程学院，广东 广州 510640)

目的：构建靶向血管紧张素原(AGT)基因的RNA干扰质粒，研究AGT基因对鼠前脂肪3T3-L1分化的影响。方法：设计靶向AGT的小分子RNA干扰片段(AGT-shRNA)，以未靶向任何DNA的小分子RNA(Non-shRNA)为对照，利用载体psiRNA-U6.1/Neo构建重组表达质粒，转染鼠前脂肪细胞3T3-L1并筛选到稳定转染细胞株，RT-PCR和SDS-PAGE法分别检测AGT基因沉默效果，通过显微镜观察和脂肪细胞分化标志物检测来确定AGT基因干扰对3T3-L1细胞分化的影响。结果：成功构建AGT干扰质粒，与对照组比较，AGT基因转录水平受到显著抑制(P<0.05)，AGT蛋白表达水平也仅为对照的43.86%。AGT基因干扰后3T3-L1细胞脂质水平和甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)活性仍随分化时间延长呈上升趋势，但增长量明显低于对照组(P<0.05)。结论：RNA干扰AGT基因可明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化，提示脂肪组织中的肾素-血管紧张素系统(RAS)与脂肪代谢有重要关联。

血管紧张素原；RNA干扰；3T3-L1；分化

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)是人体内重要的体液调节系统，对稳定心血管系统功能、维持体液平衡和调节血压有重要作用，与高血压和糖尿病等疾病关系密切[1]。在RAS中，血管紧张素原(angiotensinogen，AGT)是产生具有生物活性血管紧张素的前体物质，其在肾素和血管紧张素转化酶催化下依次转化为血管紧张素Ⅰ(angiotensinⅠ，AngⅠ)和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)，AngⅡ是RAS最主要的生物活性肽，通过循环系统到达远端组织，与心脏、血管、肾脏及脑组织等靶器官的特异性受体(angiotensin receptor，AT)结合，产生信号传导而发挥其生理功能[2]。脂肪组织中表达RAS的所有组分，肥胖者同时伴有RAS的过度活跃，提示脂肪组织RAS与脂肪代谢及肥胖有密切关联[1,3]。……