肖　斌，刘荣荣，刘炳彤，张学武

(延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室，吉林 延吉133000)

TTF1-NP诱导人肝癌 HepG-2细胞凋亡的内质网应激作用

肖斌，刘荣荣，刘炳彤，张学武

(延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室，吉林 延吉133000)

目的：通过不同剂量长白山珍珠梅黄酮纳米粒(TTF1-NP)分别诱导不同种人肝癌细胞和人正常肝细胞凋亡，探讨TTF1-NP对不同细胞的作用及涉及的内质网应激作用机制。方法：以体外培养的不同种人肝癌细胞(Hep3B、HepG-2和PLC/PRF/5)和人肝细胞(Chang Liver)为模型，实验分为阴性对照组、阳性对照组(5-Fu)和TTF1-NP实验组，TTF1-NP处理浓度分别为50、100和200 μmol·L-1。采用MTT法检测TTF1-NP对不同种细胞的生长抑制作用，选择最佳抑制效果细胞(HepG-2)为主要研究细胞株；利用流式细胞术检测细胞凋亡率；应用Western blotting和免疫细胞化学染色技术检测内质网应激关键蛋白表达情况；通过内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-PBA)作用，再次检测相关蛋白的表达情况。 结果:与阴性对照组比较，不同浓度的TTF1-NP组4种细胞生长抑制率升高(P<0.05或P<0.01)，且呈一定的浓度和时间依赖关系。细胞凋亡检测，与阴性对照组比较，TTF1-NP实验组随药物浓度增加其细胞凋亡率逐渐上升(P<0.05或P<0.01)；内质网应激关键蛋白GRP78和caspase-4 随着TTF1-NP浓度增加，表达水平逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。4-PBA有效抑制GRP78和caspase-4表达，与TTF1-NP组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 结论： TTF1-NP可诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡；内质网应激途径是 TTF1-NP 诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的主要作用机制之一。

珍珠梅黄酮纳米粒；内质网应激；细胞凋亡；肝肿瘤

内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)反应是真核生物体内一个复杂的、多功能的信号转导途径，参与生物体内的细胞凋亡、自噬和氧化应激等多种生物现象[1-2]。研究[3-4]表明：ERS 参与多种肿瘤的发生、发展过程。ERS 通过活化未折叠蛋白反应、介导自噬、诱导细胞凋亡和调节氧化应激等发挥调节肿瘤生长的作用，ERS 与肝癌的发生、发展也密切相关。长白山珍珠梅(Sorbaria Sorbifolia) 属蔷薇科植物，被《抗癌中药大辞典》收录为长白山抗癌药。……