李岳娟 丁勇 袁枭龙

(河北省怀安县畜牧水产局，076150)

随着养殖规模不断扩大与集约化快速发展，动物防疫水平不断提升，疫病监测在各级动物防控部门实验室内被启动，准确评价免疫水平与身体状况的需要实验室血清学检测和检测（包括组织器官、粪便及各种棉试子）样品的实验研究方法。监测就需要大量的血清和检测样品，采血是取的血清的主要手段。采血是一项提前准备性工作，采血的质量，直接影响到监测与实验结果的判定，而采样时间、保存、运送等因数都影响着结果的准确性、可靠性。

1 禽的采血技术

1.1 采血前的准备工作。按常规操作来完成。

1.1.1 采血用具的消毒。按常规操作来完成。

1.1.2 采血部位按常规规程进行剪毛、清洗与消毒。

1.1.3 采血过程要防止扩散与传染，残余血液及所用的器具全部进行焚烧与消毒深埋。

1.1.4 抗凝剂的选用（指用全血的样品），常用的抗凝剂有：①枸椽酸钠，常用3.8%的溶液，适用于血钙的测定和血测定时的抗凝。②肝素：按要求标准配置肝素钠0.1%水溶液，分装于小试管（或小玻璃管）可使5—10ml血液不凝固，肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响。③双草酸盐抗凝剂，可用市售药品配制，适量加入供采血用的试管（或小瓶）中，一般0.5—1ml，置干燥箱内，80—100℃烘干备用。④乙二胺四乙酸二钠配成20%的溶液2滴可使7ml全血抗凝。

1.1.5 分离血清时，放置血液的试管，小玻璃瓶要倾斜成45℃角静置，利于血清析出。

1.1.6 人员自我防护，如戴眼镜、口罩、头盔与穿防护服等。

1.2 血液的采集方法

1.2.1 禽冠采血法：用针头刺破禽冠（或在禽冠尖端剪开一个小口子）吸取血液可用手挤压禽冠吸取50—60UI血，供作血涂片用。多用于需血量较小的采血，注意消毒工作，同时作好止血，可用碘酒涂抹伤口。

1.2.2 禽颈静脉采血法：右侧颈静采血，左手食指和中指压夹住禽头部，并使头偏的一侧，无名指、小指和手掌握住躯干，拇指压静脉心脏端以使静脉充血舒张。右手持注射器、针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入羽翼、倾斜30--45℃沿血管方向一侧0.4cm挑破皮肤前行0.4cm刺入静脉，再与血管平行进针0.35cm抽取血液。用酒精棉球压迫针刺处止血。适用于30日龄内的禽类。

1.2.3 禽翅内侧静脉采血法：可采血10—20ml，①器械及用具的准备与消毒：棉球、小试管或细塑料管、试管架、镊子、7＃针头的一次注射器。②手提保定。助手一手抓住两条禽腿，一手抓禽翅根部，以拇指按压静脉。③确定部位选择：注意术者左手大拇指捏住鸡禽内侧，其余四指捏住禽翅外侧展平禽翅，右手握针，沿血管方向刺入。

1.2.4 禽心脏采血法：①禽左侧向上横卧保定、拔去胸上部羽毛，寻找由胸骨走向肩胛的皮下大静脉，用酒精棉球消毒，后碘酊棉球标记部避开胸骨7#针头刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器。②仰卧保定，禽头部朝向术者，拔去胸上部少许羽毛，用手指在胸骨上一方、嗉囊下方摸得一凹窝，右手持7#针头自持有血液涌入注射器，取血后做止血与消毒工作。

2 禽类的病料采集

2.1 采集病料样品是诊断检测中至关重要的，采集的样品具有代表性、时效性、普遍性。病料采集应符合以内容：①典型性：选取症状最典型或病变最明显，具有代表性、普遍性，最好未经药物治疗过的病料。②病料采样的比例：根据诊断检测规程的具体要求，严格按照规程要求采集足够样品，不同疫病的所需样品不同，按凝似疫病的具体要求病料来采集。③根据检测要求及检测对象和检验项目的不同，选适当的采样时机，对检测结果很重要，应严格按规定的规程时间范围取样。④无菌操作条件下采样。采集检验样品，要供病理组织学检验、病原学、血清学检验，要无菌操作，对用具、容器须事先作好消毒灭菌工作，按具体规程来操作。特别是尸体剖检时需先采集样品，后剖检，以免人为污染。病理组织学检查可选用典型病的剖检后的样品。样品数量要满足诊断检测的需要，有剩余，以备复检使用。⑤一个样品一个容器，立即密封，作冷藏、冷冻或其他处理，供病毒学检验的样品，数小时内要送到实验室，超时应冷冻保存，装样品的容器应贴上标签（要防止因冻结而脱落），标明采集时间、地点、禽名称、发病时间、死亡等具体相关信息。⑥人员安全与样品包装。首先采样人自身防护按规程要求来做，同时防止病原扩散条例技术规程来操作以防范病原外泄，同时防止它本身被外部环境的污染、包装样品应防止损坏、污染和外泄等。按规定的时间送往实验室，否则影响检测质量和结果的真实性、可靠性。

2.2 血液的采集

2.2.1 病毒学检验血液样品，在禽发病初体温升高期时采样。全血样品必须是抗凝血，可选用肝素。因为杞缘酸钠对病毒有轻微的毒性作用可杀死病毒。按常规操作规程准备真空采血等或其他灭菌容器内每ml血液样品外加1ml的0.1%肝素，加入血液应摇均混合。用脱纤血时，先在容器内加入适量小玻璃球，加入血液后，反复震荡（亦可用震荡器震荡）、各1000单位每毫升血液加入量。

2.2.2 细菌学检验样品，在发病初期或发病高峰期最好为未经抗生素药物治疗。同时加抗血凝剂，同上，但值得注意不加双抗（青链霉素）或庆大或其它抗生素，贴标签送检，置4℃冰箱备用，但存放时间不宜过久，以免发生溶血。

2.2.3血清血学，按常规操作，便于扩出血清多为主，亦可用离心机折出血清。

2.2.4 寄生虫检验，一般在取血时直接做成血涂片送检即可。

2.3 组织样品采集：按常规要求采取内脏，注意应用PBS液即可。

2.4 粪便样的采集：病毒学检验样品，用新鲜粪便灭菌的棉试子从置肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便，并立即放人装有PBS液的试管内密封。细菌寄生虫检验样品与之相似。

2.5 禽流感样品采集及相关运输保存:禽流感病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖，一般最少要求8只频临死亡的病禽采集样品，泄殖腔试子、器官试子、肺与气管混合样、肠及内容物的混合样，肝、脾、肾和脑、肺等组织混合样各8个放入PBS液。

2.5.1 泄殖腔棉试子将医用棉试子插入禽肛门并旋转，使粪便粘在棉试子上，后放人PBS液的缓冲液中送检运输。

2.5.2 气管棉试子：活禽采样时，将置棉试子插入活禽的气管内，轻轻擦试气管壁并放人缓冲液中。

2.5.3 粪便，取频临或刚死亡禽的新鲜粪便，用医用棉试子沾取粪便，放在PBS缓冲液中。

2.5.4 采集15只病禽血液样本，采血样为3—5ml，自然折出血清或离心均可，同时棉试子为防制感染可用下列PBS液；PH值调为7.0—7.4的PBS值，加入3000UI/ml青霉素、链霉素3mg/ml、庆大霉素1—2万UI/ml、制霉菌素（10000UI/ml），但粪便和泄殖腔试子抗生素分为：1.5万UI/ml，制霉菌素（50000UI/ml），PH值应调至7.4。而新城疫，以脑和肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。

2.6 操作规程

2.6.1 人员自我护服规程。

2.6.2 采样环境要求规程。

2.6.3 采样单填写要求规程。