胡珊 王永清

川崎病外周血淋巴细胞与T细胞亚群的相关性分析

胡珊 王永清

目的 探讨川崎病（KD）患儿外周血淋巴细胞与T细胞亚群的相关性，为川崎病免疫学机制研究提供参考。方法 47例KD患儿及对照组51例支气管肺炎患儿，入院后同时采集外周血检测淋巴细胞计数、比例，以及T细胞亚群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比。分别对各项结果进行相关性分析。结果 川崎病组外周血淋巴细胞计数及比例与CD 56+CD 16+均呈负相关（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05）；川崎病组及对照组淋巴细胞比例与CD 3+及CD 4+呈正相关（r=0.38，P＜0.01，r=0.28，P＜0.05；r=0.51，P＜0.01，r=0.33，P＜0.05）。2组淋巴细胞计数及比例与其他T细胞亚群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均无相关性。结论 外周血淋巴细胞与T细胞亚群的相关性结果提示T淋巴细胞参与川崎病急性期的免疫反应机制，对川崎病发病机制研究可能有辅助意义。

川崎病；淋巴细胞；T细胞亚群

川崎病（kawasaki disease，KD）是一种病因未明的好发于5岁以下儿童以全身血管炎为主要病变的急性发热出疹性疾病，以免疫系统激活和血管内皮系统广泛损害为特征，已成为儿童后天性心脏病的重要因素之一[1]。由T细胞介导的免疫应答机制，尤其表现在T淋巴细胞引起的特异性免疫紊乱现象，在KD发病机制研究中引起一定的关注。本研究对KD住院患儿外周血淋巴细胞与T细胞亚群的检测结果进行相关性分析总结，以观察KD患儿急性期免疫功能状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取常州市第一人民医院儿科于2004年1月～2012年12月确诊KD的47例住院患儿临床资料作为KD组，所有病例均符合美国心脏病协会2004年川崎病临床诊断指南修订的KD诊断标准[2]。其中男27例，女20例，男女比例为1.35∶1；年龄6个月～12岁，平均年龄（33.3±28.1）个月；住院时间9～21 d，平均（14.3±3.7）d。入院时冠状动脉病变（coronary artery lesion，CALs）发生率为15%（7/47）。选取同期51例支气管肺炎住院患儿（排除支原体肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎等）作为对照组，其中男27例，女24例，男女比例为1.17∶1；年龄2个月～7岁，平均年龄（30.4±21.3）个月；住院时间5～15 d，平均（7.4±2.3）d。2组患儿一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 检测方法 2组患儿入院后同时抽取外周血检测淋巴细胞及T细胞亚群。采用流式与激光技术检测外周血淋巴细胞计数及百分比，仪器来源于日本Sysmex XE-2100型号检测仪。采用流式细胞仪检测T细胞亚群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比，仪器来源于美国BD FACSCalibur型号检测仪。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件处理数据。计量资料用“x±s”表示，组间比较采用独立样本t检验。数据采用双变量线性相关分析，分析结果以Pearson相关系数r表示，-1＜r＜0表示负相关，0＜r＜1表示正相关。线性趋势采用散点图表示。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2组患儿淋巴细胞及T细胞亚群比较，差异无统计学意义。见表1。KD组外周血淋巴细胞计数及比例与CD 56+CD 16+均呈负相关（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），线性趋势散点图呈近似负相关。KD组及对照组淋巴细胞比例与CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相关，线性趋势散点图呈近似正相关。2组淋巴细胞计数及比例与其他T细胞亚群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均无相关性。见表2、表3。线性趋势见散点图（图1～6）。

3 讨论

近年来KD发病率呈逐年增长趋势，但其发病机制尚未完全明确[3]，大多数学者认为T淋巴细胞和B淋巴细胞介导的免疫应答及炎性细胞因子的级联放大效应引起全身血管炎性损伤，导致急性期、恢复期甚至更久血管内皮细胞损伤及功能障碍，是引起KD免疫机制的重要因素；常常由一种或多种广泛分布的感染源侵犯易感人群而引起[4]。

本研究对47例KD患儿及51例肺炎患儿数据统计结果显示，2组淋巴细胞计数、比例以及T细胞亚群数据比较差异均无统计学意义。且肺炎组已排除相关免疫因素参与的病原菌病例，提示在KD急性期，相较于红细胞沉降率、CRP等炎性指标的异常，T细胞亚群在发病早期的变化尚不明显；说明在KD急性期或发病早期，其免疫紊乱状态体现的并不显著。也有学者通过分析KD早期T细胞亚群等在ROC曲线下特征，发现其各指标的诊断特异度及敏感度均偏低，故认为T细胞亚群尚不能作为KD的早期诊断指标[5]。

表1 2组患儿淋巴细胞及T细胞亚群比较（x±s）

表2 川崎病组淋巴细胞计数及比例与T细胞亚群相关性分析结果

表3 对照组淋巴细胞计数及比例与T细胞亚群相关性分析结果

图1 川崎病组

图4 川崎病组

图2 川崎病组

图5 对照组

图3 川崎病组

图6 对照组

3.1 淋巴细胞与CD 56+CD 16+本研究结果显示，KD组外周血淋巴细胞计数及比例与CD 56+CD 16+均呈负相关（r= -0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），线性趋势散点图呈近似负相关；肺炎组统计结果显示均无相关性。CD 56+CD 16+主要表达于NK细胞表面，这种负相关性提示KD急性期外周血淋巴细胞越高，NK细胞表达水平反而降低，与部分文献报道结果相一

致[6-7]。

KD急性期NK细胞水平的变化与其参与急性期免疫机制有关。Charles等[8]发现KD急性期，在损伤动脉壁可见大量NK细胞和单核/吞噬细胞的聚集和浸润，可进一步推断外周血NK细胞表达水平的降低与其参与KD急性期免疫反应的消耗增加有关。另一方面，有研究显示[9]，KD急性期外周血CD 16+NK细胞绝对计数明显降低，但NK细胞在外周血中的变化是否为KD发病机制中的主要因素尚未明确。

3.2 淋巴细胞与CD 3+及CD 4+本研究结果显示，KD组及肺炎组淋巴细胞比例与CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相关，线性趋势散点图呈近似正相关。2组淋巴细胞计数及比例与其他T细胞亚群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均无相关性。

一方面，提示可从KD患儿外周血淋巴细胞比例粗略推断T细胞亚群CD 3+及CD 4+的变化趋势。这种正相关性现象说明，外周血淋巴细胞比例越高，KD急性期由CD 4+T细胞分化而来的Th 1/Th 2细胞及相关细胞因子的表达水平亦相应升高[10]。故从T淋巴细胞比例的失调及表达功能的异常，可间接反映出KD急性期存在细胞免疫功能的紊乱。本组病例未进行T淋巴细胞活化的相关检测，但在KD急性期T淋巴细胞所体现的正相关性，以及细胞因子的级联放大效应，提示KD患儿在免疫紊乱过程中，可能同时伴有部分炎性介质的参与。

另一方面，淋巴细胞比例的高低与其他细胞系统变化有关，本研究结果显示仅有淋巴细胞比例存在一定正相关性，其他细胞系统的失调可能同时参与KD免疫系统紊乱过程，尤其是单核/巨噬细胞系统[11-12]及中性粒细胞[13]的改变。

研究结果显示，KD急性期中性粒细胞的的变化与IVIG对KD的疗效以及并发CALs密切相关[14-15]。并且，作为预测IVIG无反应性及并发CALs高危因素的重要评分系统之一——小林评分[16]，其中即包含一项：中性粒细胞比例≥0.80（2分），说明中性粒细胞比例越高，可能更易发生IVIG无反应性及CALs。结合本文相关性分析结果，若淋巴细胞比例越高，中性粒细胞比例越低，则NK细胞表达水平越低，且CD 3+及CD 4+表达越高。故可以推断，从KD急性期外周血淋巴细胞比例可粗略估计患儿免疫功能紊乱程度，为KD急性期治疗提供部分参考（如IVIG使用剂量或是否加用激素等），但尚不能凭单一指标来制定合适方案。

3.3 T细胞亚群与KD免疫机制分析 T细胞亚群作为反映机体细胞免疫功能的一项重要指标，在KD患儿免疫机制的研究较为广泛，本研究结果显示，外周淋巴细胞与T细胞亚群CD 56+CD 16+以及CD 3+、CD 4+存在一定的相关性分析，从而可粗略估计KD患儿免疫功能紊乱状态，为临床实践提供部分参考。有学者[17]认为KD患儿急性期外周血CD 3+及CD 8+百分比明显下降，CD 4+百分比、CD 4+/CD 8+、血清IL-2及sIL-2 R水平明显升高，提示川崎病患儿急性期存在细胞免疫功能及免疫调节功能紊乱。Hirabayashi等[18]发现，且缺乏CD 4+CD 25+FOXP 3+调节性T细胞的KD患儿更易发展为IVIG-无反应型，提示调节性T细胞在KD免疫机制及预后转归中仍有重要作用。故作为KD免疫机制的重要环节，由T淋巴细胞引起的免疫调节功能损伤仍需更为广泛的研究成果以完善补充。

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Objective To investigate the correlations between lymphocytes and T-cell subsets in blood for Kawasaki disease (KD) in children, providing some references for immunological mechanisms of KD. Methods A total of 47 children with KD and 51 children of bronchopneumonia as the control group were observed with lymphocytes and T-cell subsets of blood at the same time, which including CD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 4+/ CD 8+and CD 56+CD 16+. All the results were tested by correlation analysis respectively. Results We found the negative correlation between the count and the ration of lymphocyte and CD 56+CD 16+(r=-0.369, P＜0.05；r=-0.316, P＜0.05) in KD group. There was positive correlation between the ration of lymphocyte in both the two groups and CD 3+(r=0.384, P＜0.01；r=0.283, P＜0.05) and CD 4+(r=0.511, P＜0.01；r=0.326, P＜0.05). There was no significant difference in other test dates in correlation analysis between two groups. Conclusion The results of correlation analysis between lymphocytes and T-cell subsets in blood, indicated that T lymphocytes participant in the immunological mechanisms in acute KD, which maybe helpful for the pathogenesis research of Kawasaki disease in children.

Kawasaki disease；Lymphocytes；T-cell subsets

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.29.001

江苏 213000 苏州大学附属第三医院常州市第一人民医院儿科（胡珊 王永清）

胡珊 E-mail:hushan 2011@163.com