廉宜君，陈韩英，李炳奇，谷新利*

（1.石河子大学化学化工学院，新疆 石河子 832000；2.石河子大学药学院；3.石河子大学动物科技学院）

奶牛复方促孕灌注液的安全性和稳定性试验研究

廉宜君1，陈韩英2，李炳奇1，谷新利3*

（1.石河子大学化学化工学院，新疆 石河子 832000；2.石河子大学药学院；3.石河子大学动物科技学院）

为了解奶牛复方促孕灌注液的安全性和稳定性，采用急性毒性试验、蓄积毒性试验、刺激性试验对促孕灌注液进行安全性评价，并采用强光照射试验、高湿度试验、加速试验和室温留样观察试验考察其稳定性。结果表明，制备的灌注液属无毒、无刺激药物，并且稳定性良好。

促孕灌注液；安全性；稳定性

石河子大学动物科技学院针对奶牛不孕现状，研制开发了中药复方“促孕散”，该方由淫羊藿、益母草等九味中药，依辨证论治疗原理配制而成，主要用于治疗母畜卵巢静止和持久黄体引起的不孕症，临床效果显著[1]。以“促孕散”为基础制备的灌注液，有效成分利用率高，临床用药量明显减少，且操作方便。最明显的优势是药液质量可控，改变了用药途径，使药物直达患处，能直接对病症进行治疗。

药物毒性反应的危害是国际社会共同关注的问题。长期以来，人们普遍认为，纯中药制剂毒性很小甚至无毒，但近年来有关中药的不良反应时有报道，特别是某些注射用中药致人死亡事件的发生令人担忧，使人们开始重新审视中药的安全性，而对中药及其制剂用于防治疾病时，必须进行毒性试验，同时药物的安全性试验数据也是新药审批的必备材料[2]。该灌注液为经奶牛子宫灌注的黏膜类用药，也必须符合黏膜类药物的相关要求。

本研究通过采用急性毒性试验、蓄积毒性试验、刺激性试验，并采用加速试验及室温留样考查试验等方法考察其安全性和稳定性，为该制剂用于兽医临床治疗奶牛不孕症提供安全性和稳定性的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

奶牛复方促孕灌注液（自制），昆明种成年雌性小白鼠（石河子大学实验动物中心提供），雌性新西兰兔（由石河子大学实验动物中心提供，平均体重为1.9～2.3 kg），饲养于恒温（23±3）℃动物房内，动物房通风良好，光照12 h，湿度50%～60%，每天上、下午各排气1次，每次30 min以上。

1.2 试验方法

1.2.1 促孕灌注液安全性检验

1.2.1.1 试验前动物处理

试验动物购回后，先预饲1周，使其适应新环境。预饲期间，保持动物生活环境的清洁，提供充足的食物及饮水，并仔细观察其活动情况，若发现有行为异常及生病情况的，应及时挑出，以免影响试验结果。

1.2.1.2 急性毒性试验

取健康小白鼠30只，随机分为3组，用药前12 h禁食不禁水，腹腔注射量分别是：第1组0.5 mL/10 g体重，第2组0.25mL/10 g体重，第3组0.125 mL/10 g体重。同时设不给药对照组。给药后常规饲养，观察3 d内小白鼠死亡情况，计算LD50[3]。

3 d内若有死亡，应立即进行尸检；试验结束时也应进行尸检，观察其内脏器官的变化情况。

1.2.1.3 蓄积毒性试验

取健康小白鼠30只，体重约20 g，随机分为3组，给药前12 h禁食不禁水，给药量分别是：第1组0.1 mL/只，第2组0.2 mL/只，第3组0.3 mL/只。同时设不给药对照组。给药后常规饲养，连续给药20 d，在给药期间每天观察小白鼠的生理状态和活动情况（包括精神状况和饮食状况等）。给药结束后再观察1周，并剖杀尸检，观察其内脏组织器官有无异常[4]。

1.2.1.4 刺激性试验

选取正常健康家兔6只，采用同体自身对照，用药前先观察并记录角膜、虹膜及结膜情况，剔除有病变或炎症者。试验时在左眼结膜囊内滴入0.l mL生理盐水，右眼滴入0.1 mL的促孕灌注液，然后使其被动闭合眼睛8～10 s，观察给予药物1 h、24 h、48 h，72 h后眼睛的反应情况，并按表1进行评分[5]。

表1 眼刺激反应评分标准

1.2.2 促孕灌注液稳定性检验

参照文献[6]中2010年版附录药物稳定性试验指导原则确立了稳定性研究考察项目，检测指标为外观与色泽、微生物限度及pH值。

1.2.2.1 强光照射试验

将促孕灌注液放入自制木箱，接上100W白炽灯全天照射灌注液，按时取样观察并测定相关指标[7]，取样时间为：0天（当天）、第5天、第10天。各测定项以0天为参照。

1.2.2.2 高湿度试验

在干燥器下部放置KNO3溶液，使其达到温度25℃，相对湿度（90±5）%的条件，再将灌注液放入干燥器内按时取样观察并测定相关指标，取样时间为：0天（当天）、第5天、第10天。各测定项以0天为参照。

1.2.2.3 加速试验

将促孕灌注液在温度（40±2）℃、相对湿度（60 ±5）%的条件下放置3个月，试验期间每个月取样观察并测定相关指标。各测定项以0天为参照。

1.2.2.4 室温留样观察试验

取促孕灌注液样品，在室温下放置12个月。每隔3个月取样观测其外观色泽、澄清度、测定pH值。各测定项以0天为参照。

2 结果与分析

2.1 急性毒性试验结果

小白鼠注射药物后2 h内有轻微不适，食欲减退，饮水量正常；注射药物4～6 h，小白鼠活动恢复正常，未见任何异常反应；7 d内无小白鼠死亡。断颈处死后解剖观察小白鼠内脏，均无异常。本试验小白鼠注射灌注液量相当于生药量500 g/kg体重，LD50远远大于15 g/kg体重毒理学评价标准。证明该促孕灌注液属无毒类物质。

2.2 蓄积毒性试验结果

3组小白鼠分别按 0.1 mL/只，0.2 mL/只，0.3 mL/只给药20 d，在给药期间和停药后7 d内，小白鼠无死亡现象，也无异常反应。给药结束后再观察1周，并剖杀称重尸检，各试验组小白鼠体重与对照组无显著性差异，观察其内脏组织器官均健康无异常。说明该促孕灌注液基本上无蓄积毒性。

2.3 刺激性试验结果

在给家兔右眼滴入促孕灌注液6 h后，6只家兔出现不同程度的眼结膜血管充血现象，并有少量分泌物，无水肿症状，表明该灌注液具有较弱的刺激作用，而随着时间的推移，其刺激作用越来越弱，24 h后充血现象逐渐减弱，48 h后充血现象基本消失，除个别有少量分泌物外，角膜、虹膜在滴入药液后无任何症状出现，综合评分为3分，按药理学实验标准判定为无刺激性药物。表明该促孕灌注液是一种符合黏膜用药的制剂。

2.4 强光照射试验结果

促孕灌注液强光照射试验结果见表2。由表2可知，促孕灌注液在100 W强光照射的条件下放置10 d，物理性状没有改变，外观均为棕色的清亮液体，药液气味芳香，pH值基本不变。

表2 强光条件下促孕灌注液的检测结果

2.5 高湿度条件下的试验结果

促孕灌注液高湿度条件下的试验结果见表3。由表3可以看出，促孕灌注液在温度25℃，相对湿度（90±5）%的条件下，物理性状几乎没有改变，外观均为棕色的清亮液体，无任何杂质，气味芳香，pH值基本不变。

表3 高湿度条件下促孕灌注液的检测结果

2.6 加速试验结果

促孕灌注液加速试验结果见表4。由表4可以看出，在温度40℃，相对湿度75%的条件下观察5个月，从每月的取样观察、测定结果可知该促孕灌注液的物理性状几乎没有改变，外观均为棕色的清亮液体，澄清无沉淀，气味芳香，pH值基本不变。

表4 加速试验条件下灌注液的检测结果

2.7 室温留样观察试验结果

该灌注液经12个月室温留样考察，药液均无异常现象，物理性状几乎没有改变，外观仍为棕色的清亮液体，无杂质，pH值保持在6.6～6.8，药物稳定，结果与加速试验基本一致，故认为本灌注液基本能保证药品的质量，因此有效期可暂定1年。

3 讨论

（1）中药毒性可以被理解为中药不良反应。本试验从急性毒性试验、蓄积毒性试验、刺激性试验几个方面，对灌注液进行了安全性评价。从试验结果可以看出，LD50远远大于15.00g/kg体重，根据兽药安全评价标准，当LD50＞15g/kg体重时，药物属于无毒性物质，所以该灌注液属无毒类药物。（2）在蓄积毒性试验中，给小白鼠连续给药20 d，未出现死亡，在停药1周内，小白鼠仍未出现死亡，证实了灌注液无蓄积毒性。给药组小鼠在灌胃后短时间内出现轻度腹泻，粪便稀软的现象，分析可能是药物浓度较高，灌药量较大对胃肠等器官造成较大压迫作用，致使胃肠蠕动兴奋。（3）该促孕灌注液经奶牛子宫灌注，必须保证药物对奶牛子宫用药的安全性，从刺激性试验结果可知，其符合黏膜类药物的制剂要求，为该药液的临床应用奠定了基础。（4）从稳定性试验可知，促孕灌注液在100W强光照射的条件下放置10d或在相对湿度（90 ±5）%的环境中或在5个月的加速试验期内稳定，该促孕灌注液的物理性状几乎没有改变，外观均为棕色的清亮液体，澄清无沉淀，气味芳香，pH值基本不变。该灌注液经12个月室温留样考察，各项指标均无明显改变，药物稳定。有效期可暂定1年。

[1]罗瑞卿，谷新利.促孕散治疗奶牛卵巢疾病引起不孕症的研究[J].石河子大学学报（自然科学版），2009，27（4）：455-457.

[2]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典（2000版）二部[M].北京：农业出版社，2000.

[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996.

[4]徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002.

[5]引乾，罗延红，蒿彩菊，等.药理学实验指导[M].陕西杨凌：西北农林科技大学出版社，1998.

[6]国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社，2010.

[7]辛蕊华，谢家声，郑继方，等.射干地龙颗粒的含量测定及制剂稳定性研究[J].中国畜牧兽医，2013，40（7）：29-33.

新疆以工代赈示范工程获中央投资1.04亿元

6月2日，新疆维吾尔自治区发改委在网站公布，近日，国家发展改革委下达了我区以工代赈示范工程2015年中央预算内投资计划，安排资金1.04亿元，创近年来新高。

此次计划主要安排在和田、喀什、克州等7个地州的英吉沙、洛浦、莎车、塔什库尔干、尼勒克、托里、青河等21个县。重点支持跨区域、综合性示范效果和带动作用强的田间水渠配套、小流域治理、草场建设、中低产田改造、断头连接路等基础性工程。

以工代赈示范工程是国家在贫困地区实施的，对调整当地产业结构和增加农牧民收入具有典型示范带动效益的项目。自1984年至今，已是我区实施以工代赈项目第31个年头。

（《新疆都市报》）

2015—05—06

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：谷新利，男，汉族，教授，博士，博士生导师。