刘崇，高颖，杨洪一

(东北林业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨150040)

感染辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus，PMMoV)后，辣椒植株陆续出现叶片变黄、褶皱、青斑等症状，结果期会出现萎缩、斑驳等症状[1–4]。PMMoV 最早在美国被发现，其后在丹麦、日本、西班牙、加拿大、澳大利亚等国均有发现[1]。1994年，向本春首次在中国新疆辣椒上发现PMMoV[2]，后来有人相继在青岛、保定、宁夏等地区发现了该病毒[3–4]。PMMoV 现已成为一种世界性病害。PMMoV 为正单链RNA 病毒，病毒粒子为杆状[5]。因为PMMoV 侵染辣椒植株的早期症状多不明显，且该病毒可以通过种子、花粉、汁液摩擦等进行传播[6]，所以，建立病毒的快速检测体系具有重要应用价值。PMMoV 的常规检测主要是采用血清学方法，国外目前已有商业化的试剂盒销售，但试剂盒灵敏度较低，检测结果易受叶片幼嫩程度、感病时期等因素影响[4,7–9]。利用 RT–PCR 技术检测PMMoV 是近年来发展较迅速的方法。因为该方法需要高质量的辣椒总核酸，所以，整个检测体系的技术含量较高[10]。分子杂交技术作为一种高灵敏度及高稳定性的检测技术曾受到广泛关注，但放射性探针的安全性、非放射性探针的成本问题极大限制了该方法的普及。近年来，随非放射性标记物成本的降低，该技术已具备被大规模应用的潜力。笔者探索PMMoV 的分子杂交技术检测方法，以期获得有效、快速检测PMMoV 的技术体系。

1 材料和方法

1.1 植物材料

已感染PMMoV 的辣椒植株(表现为叶片黄化、果实畸形)取自吉林九台。试验中的PMMoV 阴性、阳性植株分别利用DAS–ELISA、RT–PCR 进行鉴定[10–11]；……