刘会珍，罗为桂，谢伟民，胡月清，苏益，萧浪涛，蔺万煌

(湖南农业大学植物激素与生长发育湖南省重点实验室，湖南 长沙 410128)

植物生长素是最早被发现的一类植物激素，其中IAA(indole–3–acetic acid)是主要的活性物质[1]。作为信号分子，IAA 在植物胚胎中轴建立[2]、侧生器官形成[3]、叶序排列[4]、维管束发育[5]、向光反应[6]以及根向重力[7]等方面都发挥着重要的调节作用。近年来，有关生长素生物合成和信号转导途径的研究取得了巨大的进展，生长素信号转导级联反应的基本轮廓已经形成[8]。在生长素信号转导途径中包含一类重要的转录抑制因子AUX/IAAs[9–12]，它能与生长素受体TIR1(transport inhibitor response 1)形成共受体[13–15]。Aux/IAA 蛋白具有4个结构域(DI、DII、DIII 和DⅣ)，在低浓度IAA 环境中，Aux/IAA 与多个生长素响应因子(ARFs)形成复合物，可阻碍响应IAA 的相关基因的转录[16–18]；Aux/IAA 又是一种短命的核蛋白，在高浓度IAA 环境中，IAA 就像分子胶一样可促使 SCFTIR1与Aux/IAA 相互结合，诱发Aux/IAA 蛋白的泛素化降解，从而解除对生长素应答基因的阻遏作用[19–20]。

目前，模式植物拟南芥的IAA1[21]、IAA4[22]、IAA7[23]、IAA9[24]和IAA28[25]等Aux/IAA 蛋白质家族成员的重要功能已经有了较详细的解析。Aux/IAA 蛋白与AtTIR1、AFB1 和AFB3 等蛋白具有较强的相互作用[19]，并且这种结合与生长素信号紧密相关，这就预示着Aux/IAA 蛋白可能具有重要的实际应用价值。据此，本研究中构建IAA7 的原核表达载体，在大肠杆菌中表达IAA7 蛋白，通过GST 亲和树脂获得纯化的IAA7 蛋白，旨在为后续对IAA7 的应用研究提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

拟南芥(Arabidopsis thaliana L.) 野生型Columbia(Col–0)；大肠杆菌(Escherichia coli)克隆菌株 DH5α；大肠杆菌表达菌株 Tuner(DE3)、Rosetta(DE3) 、 BL21(DE3) 及 原 核 表 达 载 体pGEX–KG。以上材料均由湖南农业大学植物激素与生长发育湖南省重点实验室保存。……