张腾国，聂亭亭，陈琼琼，毛玉珊

（西北师范大学生命科学学院，兰州730070）

白菜型油菜CBF基因克隆及功能分析

张腾国，聂亭亭，陈琼琼，毛玉珊

（西北师范大学生命科学学院，兰州730070）

利用RACE技术从‘陇油6号'油菜中克隆得到1个新的CBF（C-repeat binding factor）基因（GenBank登录号为KP974691），全长1 000 bp，其中包括5＇-UTR 114 bp，3＇-UTR 241 bp，开放阅读框645 bp，编码215个氨基酸，推测的蛋白质分子量23.8 kD，理论等电点为4.86。在氨基酸序列水平上，该基因与多种植物具有较高的一致性，其中与萝卜、紫茎泽兰、卷果涩荠和拟南芥的一致性分别为93.5%、83.7%、81.0%、79.0%。实时荧光定量PCR分析表明，CBF基因在油菜的茎、叶和下胚轴中均有表达，没有组织特异性；该基因表达受低温、ABA、H2O2诱导，MAPKK抑制剂U0126预处理12 h再经低温、ABA、H2O2诱导，与单独处理结果相比，CBF基因表达明显降低，表明该基因在油菜适应低温、ABA、H2O2胁迫过程中发挥作用。

油菜；CBF基因；分子克隆；表达分析

植物为了维持正常的生长和发育，需要不断地感知和适应外界环境的变化。低温是主要的环境胁迫因素之一，当受到低温胁迫时，绝大多数植物需要经过一段低温驯化过程以获得对低温的耐受能力。在植物响应低温胁迫的驯化过程中，可引起自身生理生化和分子水平上的变化［1］，包括细胞和组织结构的改变、新陈代谢过程以及基因表达水平的变化等［2］，其中以低温激活或抑制基因的转录最为重要。拟南芥中受低温调节的基因占基因组的4%～20%［3］，其中有一类低温胁迫响应基因COR（cold responsive），其启动子区有干旱反应元件DRE/ CRT，拥有共同的核心基序（CCGAC）。Stockinger等［4］从拟南芥中分离得到了能够结合干旱反应元件DRE/CRT的转录因子DREB1/CBF。……