李智，谢兴亮，王婷，韩玉佩，韩永彬

(1.成都第一骨科医院药剂科，成都 610031；2.成都医学院药学院，成都 610083)

不同厂家香连丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定*

李智1，谢兴亮2，王婷2，韩玉佩2，韩永彬2

(1.成都第一骨科医院药剂科，成都 610031；2.成都医学院药学院，成都 610083)

目的 建立同时测定香连丸中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法，分析不同厂家香连丸中两成分含量。方法 采用高效液相色谱法，色谱条件：Chromsil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，以甲醇-水(65：35)为流动相，流速1 mL·min-1，检测波长225 nm，柱温30 ℃。结果 木香烃内酯、去氢木香内酯分别在0.009 4～0.023 6 μg和0.021 8～0.108 8 μg 进样量范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6，0.999 2)，木香烃内酯、去氢木香内酯的回收率均在95%～105%。不同厂家香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量范围分别为0.16～0.83 mg·g-1和1.45～7.40 mg·g-1。结论 该方法可准确测定香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，市售香连丸中两成分含量差别较大，需要加强其质量控制。

香连丸；木香烃内酯；去氢木香内酯；色谱法，高效液相

香连丸为始载于唐·李绛《兵部手集方》的经典方剂[1]，是由萸黄连和木香两味中药组成的复方制剂，主要用于治疗肠炎、细菌性痢疾、胃脘痛等胃肠疾病[2-3]。该方具有抗菌抗炎、解痉止痛、止泻、抗消化性溃疡等作用[4-7]，其中生物碱和内酯类成分为主要药效成分[8-9]，《中华人民共和国药典》2010年版一部只对该制剂中盐酸小檗碱含量进行测定，而未控制内酯类成分的含量[2]。为了进一步完善质量标准，在参考木香含量测定方法[10]的基础上，笔者拟考察建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)法测定香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯含量，并对收集到不同厂家香连丸样品中的两成分含量进行测定，以了解不同厂家产品的质量差异，为进一步提高其质量控制水平提供实验基础。

1 试药与仪器

1.1 试药 香连丸(水丸，湖北A厂，批号：100301；湖北B厂，批号：100815；湖北C厂，批号：100901，100902，100101)，木香烃内酯对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0301，含量≥99.0%)，去氢木香内酯对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0302，含量≥99.0%)。甲醇(色谱纯)、纯净水，磷酸二氢钾、磷酸氢二钠等试剂均为分析纯。

1.2 仪器 高效液相色谱仪(戴安-Mltimate3000)，电子天平(德国Sartorius BP211D，感量：0.01 mg)，AS5150A超声仪(奥特赛恩斯仪器有限公司)，RC-6型溶出测定仪(天津市国铭医药设备有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 参照2010年《中华人民共和国药典》一部木香含量测定项条件，色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水(65：35)，检测波长225 nm，流速1.00 mL·min-1，柱温：30 ℃，理论板数按木香烃内酯峰计算应均不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备 取木香烃内酯对照品、去氢木香内酯对照品，精密称定，加甲醇溶解定容，配制成浓度分别约为1，10 μg·mL-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取香连丸(批号：100901)研细混匀，再取该粉末约0.8 g，精密称定，分别加入25 mL量瓶中，用甲醇定容，称定质量，放置过夜，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，加甲醇补足减失质量，摇匀，用内径0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。

2.4 木香阴性样品溶液的制备 取黄连粉末约0.6 g，精密称定，按“2.3”项下方法同法操作，得木香阴性样品溶液。

2.5 系统适应性实验 分别精密吸取木香烃内酯对照品溶液、去氢木香内酯对照品溶液、供试品溶液及木香阴性样品溶液各10 μL注入液相色谱仪，在上述色谱条件下检测各样品色谱图，结果见图1。结果表明，香连丸供试品色谱图中在木香烃内酯、去氢木香内酯对照品色谱峰相应位置均有对称色谱峰，分离度良好，而木香阴性样品色谱图在上述位置无干扰，满足测定要求。

2.6 精密度实验 分别精密吸取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品溶液10 μL，连续进样6次，分别测定峰面积，计算峰面积RSD。结果木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.75%，0.48%，表明精密度良好。

2.7 线性关系考察 分别精密吸取1.178 μg·mL-1木香烃内酯对照品溶液8，14，16，18，20 μL和10.88 μg·mL-1去氢木香内酯对照品溶液2，4，6，8，10 μL进样，测定其峰面积，以进样量为横坐标(A)，峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，木香烃内酯的回归方程为：Y=125.73A-0.505 2，r=0.999 6，去氢木香内酯的回归方程为：Y= 62.422A-0.118 9，r=0.999 2，结果表明，木香烃内酯、去氢木香内酯分别在0.009 4～0.023 6 μg和0.021 8～0.108 8 μg峰面积与进样量线性关系良好。

2.8 供试品溶液提取方法考察 取香连丸粉末4份，每份约0.8 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇定容，称定质量，放置过夜，其中两份超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，加甲醇补足减失质量，摇匀，用内径0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液加甲醇稀释10倍后备用。另两份水浴回流提取30 min，冷却，再称定质量，加甲醇补足减失质量，摇匀，用内径0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液加甲醇稀释10倍后备用。精密吸取上述供试品溶液各5～10 μL进样测定峰面积，计算含量，结果回流法和超声法木香烃内酯提取率分别为0.75，0.80 mg·g-1，去氢木香内酯分别为2.48，2.64 mg·g-1。结果表明，超声法对两成分的提取率均高于回流法，且操作更为简便。

A.木香阴性样品；B.木香烃内酯对照品；C.去氢木香内酯对照品；D.香连丸样品；1.木香烃内酯；2.去氢木香内酯

A. negative reference of Costustoot; B.costunolide reference; C.Dehydrocostus lactone reference; D.Xianglianpallet sample; 1.costunolide; 2.dehydrocostus lactone

Fig.1 HPLC chromatogram of negative reference,reference and samples

2.9 供试品溶液提取时间考察 取香连丸粉末6份，每份约0.8 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇定容，称定质量，放置过夜，分别各取两份，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30，60，90 min，放冷，再称定质量，加甲醇补足减失质量，摇匀，用内径0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液加甲醇稀释10倍后备用。精密吸取上述供试品溶液各5 μL进样测定峰面积，计算含量，结果处理30，60，90 min，木香烃内酯提取率分别为0.77，0.77，0.76 mg·g-1，去氢木香内酯分别为2.64，2.53，2.48 mg·g-1。结果表明，提取30 min即可将样品中两成分提取完全，且提取时间过长两成分含量均有下降的趋势。因此，拟定供试品溶液制备方法采取超声提取30 min。

2.10 稳定性实验 分别于制备后0，2，4，8，12，24 h精密吸取香连丸供试品溶液(批号：100901)10 μL，进样，测定其峰面积，结果24 h内，木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为1.98%，1.22%，供试品溶液中两成分稳定性良好。

2.11 重复性实验 取香连丸样品(批号：100901)6份，按拟定方法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算其木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，结果显示，木香烃内酯含量的RSD 为1.02%，去氢木香内酯含量的RSD 为1.26%，表明该方重复性良好。

2.12 加样回收率实验 取已知含量香连丸样品(批号：100901，木香烃内酯0.789 5 mg·g-1，去氢木香内酯2.636 5 mg·g-1)6份，每份约0.4 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别精密加入0.117 8 mg·mL-1木香烃内酯对照品溶液和0.108 8 mg·mL-1去氢木香内酯对照品溶液，加甲醇溶液定容至25 mL，按拟定方法制备供试品溶液，精密吸取5 μL注入液相色谱仪测定峰面积，计算含量。结果表明，木香烃内酯和去氢木香内酯平均回收率分别为98.7%，102.1%，RSD分别为2.96%，3.15%(n=6)，符合含量测定要求。见表1。

2.13 香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量测定 取不同厂家的5批香连丸样品按拟定方法分别制备供试品溶液，并测定峰面积，计算各批次中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，测定结果见表2。

3 讨论

笔者在本研究建立同时测定香连丸(水丸)中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法，研究表明在拟定色谱条件下，香连丸中两成分色谱峰可与其他成分实现基线分离，且方法学考察表明符合含量测定要求。以该方法对5批不同厂家香连丸中两成分含量进行测定，结果表明，不同批次香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯含量分别在0.16～0.83 mg·g-1和1.45～7.40 mg·g-1范围内变化，相差可达5倍，提示目前市售香连丸中两成分含量的较大差异。由于木香烃内酯、去氢木香内酯为香连丸解痉止痛的主要药效成分[11]，极有必要增加对香连丸中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量控制，以进一步完善香连丸的质量控制标准，确保其临床疗效。

表1 木香烃内酯和去氢木香内酯加样回收测定结果

Tab.1 Result of recovery of costunolide and dehydrocostus lactone

序号样品量加入量测得量mg回收率/%木香烃内酯 10．31620．31810．620395．6 20．31670．31810．626697．4 30．31720．31810．634499．7 40．31990．31810．6495103．6 50．31640．31810．623196．4 60．32120．31810．638399．7去氢木香内酯 11．05591．05542．1810106．6 21．05781．05542．1417102．7 31．05931．05542．1622104．5 41．06831．05542．118499．5 51．05671．05542．088997．8 61．07251．05542．1459101．7

表2 香连丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定结果

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Determination of Costunolide and Dehydrocostus Lactone inXianglianPellet from Different Manufacturers

LI Zhi1, XIE Xingliang2, WANG Ting2, HAN Yupei2, HAN Yongbin2

(1.DepartmentofPharmacy,theFirstOrthopedicsHospitalofChengdu，Chengdu610031,China; 2.SchoolofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083,China)

Objective To establish a method to determine the costunolide and dehydrocostus lactone content ofxianglianpellet simultaneously, and analyze the content of the two components inxianglianpallets from different manufacturers. Methods The column was Chromstar C18(4.6 mm×200 mm, 5 μm), the mobile phase was methanol-water (65：35), the flow rate was l mL·min-1, the detection wavelength was 225 nm, and the column temperature was 30 ℃. Results Costunolide and dehydrocostus lactone contents had good linear relationships with their peak area in the ranges of 0.009 4-0.023 6 μg and 0.021 8-0.108 8 μg (r=0.999 6 and 0.999 2), respectively.The recovery rates of costunolide and dehydrocostus lactone were both among the range of 95%-105%.The content range of costunolide and dehydrocostus lactone in xianglian pellet from different manufacturers was 0.16-0.83 mg·g-1and 1.45-7.40 mg·g-1, respectively. Conclusion The established method can exactly determine the content of costunolide and dehydrocostus lactone inxianglianpellet simultaneously.There is a large difference in the content of the two components inxianglianpellet from different manufacturers; therefore it is necessary to control its quality.

Xianglianpallet; Costunolide; Dehydrocostus lactone; Chromatography, high performance liquid

2014-01-29

2014-03-10

*四川省教学质量工程建设项目(传统香连丸“直至下焦”的药剂学原理研究)；成都医学院校基金项目(CYZ11-011)，四川省教育厅青年基金项目(10Z030)

李智(1971-)，女，四川泸州人，主管药师，硕士，研究方向：中药质量分析。电话：(0)13881903494，E-mail：lzlhk@qq.com。

谢兴亮(1979-)，男，四川乐山人，副教授，博士，研究方向：中药学及中药制剂。电话： 028-62308652，E-mail：xiexingliang1@sina.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)02-0249-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.029