翟晓虎+贺卫华+沈晓鹏+陈世杰

摘要：探索优化并构建S100A16原核表达载体、制备S100A16蛋白多克隆抗体的条件。试验方法为，将RT-PCR扩增得到的小鼠肝脏组织的S100A16基因克隆片段连接到带有His标签的原核表达载体pET-28a多克隆位点，并转化大肠杆菌BL21（DE3），用不同温度、不同浓度IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导融合蛋白表达，通过亲和层析柱纯化获得纯化的蛋白质。经免疫动物得到His-S100A16抗血清，通过免疫亲和层析获得了具有高度特异性抗体，通过Western Blot和Elisa检测抗体的特异性和效价，结果表明，在温度25 ℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L的条件下，可溶性蛋白的表达效果较好。

关键词：S100A16;Western Blot;融合蛋白表达;ELISA;小鼠

中图分类号： Q785 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）04-0039-02

收稿日期：2014-04-01

基金项目：江苏省泰州市农业项目（编号：TN2013012）。

作者简介：翟晓虎（1981—），男，山西浑源人，硕士，讲师，主要从事小动物疾病方面的研究。Tel：（0523）86651732;E-mail：zhaixiaohu010@163.com。

S100A16基因是在应用全基因组微阵列芯片技术筛查代谢性疾病相关基因的研究中新获得的差异表达基因，是钙调蛋白S100家族的新成员，除了具有S100家族的基本结构特征，还存在更复杂的调节机制。S100家族在细胞的增生、分化、迁移与凋亡，神经轴突的生长与认知形成及肿瘤发展中均发挥着重要作用[1]。关于其新成员S100A16基因与疾病发展的研究尚浅，目前尚无明确结论，经有关科研机构研究，初步阐明S100A16基因在代谢性疾病的发生发展中发挥作用。本研究拟探讨并优化S100A16多克隆抗体的制备条件与方法。

1 材料与方法

1.1 试验动物

新西兰白兔，购自江苏省农业科学院，成年公兔体质量4～5 kg，母兔体质量4.5～55 kg。……