金录胜，张旭，张蕾，于清伟，张宏

（甘肃省兽药饲料监察所，兰州730030）

RP-HPLC测定木槟硝黄散中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量

金录胜，张旭，张蕾，于清伟，张宏∗

（甘肃省兽药饲料监察所，兰州730030）

建立了RP-HPLC法测定木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯含量的方法。用十八烷基键合硅胶柱分离木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯，以甲醇-水（60∶40）为流动相，检测波长225 nm。木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯的线性范围分别为4.14～41.4 μg／mL和3.59～35.9 μg／mL，平均回收率分别为99.23%、99.00%（n＝6）。该方法简便、快速，可用于木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量测定。

木槟硝黄散；木香烃内酯；去氢木香内酯；RP-HPLC

木槟硝黄散是以槟榔、大黄、玄明粉、木香为原料加工制成的中兽药散剂，具有行气导滞、泄热通便之功效，用于实热便秘、胃肠积滞等症［1］。方中大黄苦寒，善于泻热毒、破结滞而荡涤胃肠，为君药；玄明粉咸寒，善于润肠燥、软坚结而泻下通便，为臣药；槟榔消积导气，木香温中行气，两者合用，行气止痛、消积导滞，共为佐使药。诸药合用，共奏行气导滞、泄热通便之功［2］。《中华人民共和国兽药典》二○一○年版对木槟硝黄散中各成分规定了显微鉴别，对玄明粉进行了理化鉴别，对大黄进行了薄层鉴别，未对任何组分进行定量分析［1］。试验参照木香中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量测定方法［3］用反相高效液相色谱法对木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量测定方法进行了研究。

1 仪器与试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent 1200多波长紫外检测器，METTLER AE240电子天平，BX8200HP超声波清洗器。甲醇为色谱纯，水为超纯水。木香烃内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供，111524-201208，含量为99.5%），去氢木香内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供，111525-201209，含量为99.8%）。木槟硝黄散（武威红牛农牧科技有限公司生产，批号140201、140202、140303），阴性样品（自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18柱（1.8 μm，4.6 mm×50 mm）；流动相：甲醇-水（60∶40）；流速：0.8 mL／min；进样量：10 μL；柱温：室温；检测波长：225 nm。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取木香烃内酯对照品10.35 mg，去氢木香内酯对照品8.97 mg置同一100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含木香烃内酯103.5 μg、去氢木香内酯89.7 μg的溶液，作为贮备溶液。精密量取上述贮备溶液5.0 mL置25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取木槟硝黄散约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 KHz）10 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方中药味比例自配不含木香的散剂，按其工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.5 系统适应性试验 分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入色谱仪，色谱图见图1-图3。在该色谱条件下，木香烃内酯、去氢木香内酯峰与相邻组分峰的分离度均大于3.0，理论板数按去氢木香内酯峰计不低于5000，阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰，表明处方中的其他成分对测定结果无影响，满足定量检测需要。

图1 混合对照品溶液HPLC图

图2 供试品溶液HPLC图

图3 阴性样品HPLC图

2.6 方法学考察

2.6.1 线性范围 精密量取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品贮备溶液（103.5、89.7 μg／mL）各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mL分别置25 mL容量瓶中，用甲醇定容至25 mL，摇匀，按上述色谱条件，进样10 μL，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积积分值（Y）对浓度（X，μg／mL）进行线性回归，方程为：

木香烃内酯：Y＝46.534X-8.7049（r＝0.9998），线性范围4.14～41.4 μg／mL；

去氢木香内酯：Y＝36.614X+3.623（r＝0.9996），线性范围3.59～35.9 μg／mL。

2.6.2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，连续重复进样6次，记录峰面积，计算结果，RSD分别为0.42%（木香烃内酯）、0.37%（去氢木香内酯）。

2.6.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、10、12 h进样10 μL，记录色谱峰面积，计算木香烃内酯和去氢木香内酯的峰面积的RSD分别为0.62%、0.43%。结果表明供试品溶液在室温下放置12 h基本稳定。

2.6.4 重复性试验 取同一批样品分别称取5份，按2.3项下方法制备供试品溶液，测定供试品溶液中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量。结果测得木香烃内酯含量分别为67.8、68.2、67.3、67.6、67.1 μg／g，去氢木香内酯含量分别为61.2、60.3、61.4、60.8、61.6 μg／g，RSD分别为0.64%，0.85%。结果表明此方法重复性良好。

2.6.5 加样回收率试验 准确称取已知含量的木槟硝黄散样品0.5 g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入混合对照品贮备溶液（103.5、89.7 μg／mL）0.3 mL，按2.3项下方法处理后，测定并计算回收率，结果见表1。

表1 木槟硝黄散回收率试验结果（n＝6）

2.7 样品测定 取不同批号的木槟硝黄散，按供试品溶液制备方法处理，按上述色谱条件进行测定，计算样品中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（μg·g-1）

3 讨论与小结

选用不同比例的甲醇-水为流动相进行洗脱，结果表明，以甲醇-水（60∶40）为流动相时，样品中木香烃内酯、去氢木香内酯与其它组分的分离效果最佳。本试验采用填料粒径为1.8 μm、柱长为50 mm的十八烷基键合硅胶柱，可实现快速、高效分离，与文献［4-5］使用的填料粒径为5 μm、柱长为250 mm的C18柱比较，具有分离效果好，分析速度快、可节约时间、试剂等优点。

木香为菊科云木香属植物木香Aucklandia lap-pa Decne.的干燥根，原产印度，中国云南引种栽培，是治疗胃肠疾病的常用药物，《神农本草经》列为上品。木香含有挥发油0.3%～3%，油中含有多种具有生物活性的倍半帖内酯，研究表明，木香烃内酯和去氢木香内酯具有松弛平滑肌和解痉作用，木香烃内酯能有效抑制由KCL诱导的主动脉收缩［6］。木香烃内酯和去氢木香内酯是挥发油的主要成分，为了能控制木槟硝黄散中木香烃内酯和去氢木香内酯含量，故采用高效液相色谱法进行定量分析。试验结果表明，在该色谱条件下，木香烃内酯、去氢木香内酯峰与相邻组分峰的分离度好，该方法的专属性、精密度、重复性实验符合规定，操作简便、快速，可作为制定木槟硝黄散质量标准、提高本品质量的参考依据。

目前，我国中兽药散剂质量标准大多只采用显微鉴别及薄层鉴别控制处方中各味中药，未对中药成分进行定量分析，探索对中兽药散剂中各味中药的有效成分进行定量分析的研究，有利于提升中兽药散剂质量标准的控制水平，提高产品质量。

［1］ 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二○一○年版二部［S］.

［2］ 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典兽药使用指南二○一○年版中药卷［S］.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典二○○○年版一部［S］.

［4］ 鞠成国，王巍，高慧，等.HPLC测定木香槟榔丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量［J］，中国实验方剂学杂志，2011，17（23）：74-76

［5］ 常炜.HPLC法测定智托洁白丸中木香烃内酯和去氢木香内酯［J］，中成药，2011，33（11）：1923-1926

［6］ 魏华，彭勇，马国需，等.木香有效成分及药理作用研究进展［J］.中草药，2012，43（3）：613-620

（编辑：陈希）

Determination of Costunolide and Dehydrocostus Lactone in Mubing Xiaohuang San by RP-HPLC

JIN Lu-sheng，ZHANG Xu，ZHANG Lei，YU Qin-wei，ZHANG Hong∗
（Gansu Institute of Veterinary Drug and Feed Inspection，Lanzhou 730030，China）

To establish a RP-HPLC method for determination of costunolide，dehydrocostus lactone in Mubing Xiaohuang San.A reverse-phase C18 column was used，the mobile phase was methanol-water（60∶40），the determination wave length was 225 nm，the linear range was 4.14～41.4 μg／mL and 3.59～35.9 μg／mL，and the average recovery was 99.23%and 99.00%.The method is simple and fast，and suitable in the determination of costunolide，dehydrocostus lactone in Mubing Xiaohuang San.

Mubing Xiaohuang San；costunolide；dehydrocostus lactone；RP-HPLC

2014-12-03

A

1002-1280（2015）03-0040-03

S853.7

金录胜，从事兽药检验及管理工作。

张宏。E-mail：195425319＠qq.com