宫 亮 陈 冬 李 里

(辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉科，辽宁 锦州 121000)

环磷腺苷效应元件结合蛋白磷酸化在胰岛素样生长因子-1抑制耳蜗毛细胞凋亡中的作用

宫 亮 陈 冬 李 里1

(辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉科，辽宁 锦州 121000)

目的 探讨磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(P-CREB)对胰岛素样生长因子(IGF)-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用。方法 体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。实验分为A组：正常对照培养液；B组：庆大霉素(GM)(0.5 mmol/L)；C组：GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(1 ng/ ml)；D组：GM(0.5 mmol/L)+ IGF-1(10 ng/ ml)；E组GM(0.5 mmol/L)+ IGF-1(50 ng/ ml)；F组：GM(0.5 mmol/L)+ IGF-1(100 ng/ ml)。培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用Western印迹及RT-PCR法观察P-CREB的表达情况。结果 A组无凋亡细胞。B组检测到凋亡细胞。C组细胞凋亡较B组明显减少。D组凋亡细胞减少最明显(与B组相比，P<0.05)。E组及F组凋亡细胞较D组有所增加。P-CREB：Western印迹结果及RT-PCR结果表明：A组及B组P-CREB蛋白及mRNA表达较低。与B组相比，C、D、E及F组P-CREB蛋白及mRNA明显增加，以D组增加最明显。结论 IGF可能通过激活CREB磷酸化抑制毛细胞凋亡。

毛细胞；凋亡；胰岛素样生长因子；磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(P-CREB)

环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)属于cAMP反应元件结合蛋白，其调节的经典通路为G 蛋白-cAMP-PKA 通路。该通路主要是磷酸化激活CREB；激活的CREB之间形成同源二聚体或和其他蛋白结合形成异源二聚体，后与真核生物启动子中的CRE 结合对CREB 靶基因转录进行调控。胰岛素样生长因子(IGF)-1是一种调控耳蜗生长发育及细胞间协调稳定的生长因子。目前对于IGF-1在神经细胞损伤防护中的研究较为深入，但在耳蜗发育过程中及其在耳蜗毛细胞和螺旋神经节中保护作用及其机制仍不明确。研究表明IGF-1可以抑制小鼠耳蜗毛细胞凋亡。Lebesgue等〔2〕研究表明：CREB磷酸化(P-CREB)后可以上调Bcl-2，进而抑制海马椎体细胞凋亡。……