KLF14基因过表达对改善Hepa1-6小鼠肝癌细胞胰岛素抵抗的作用

2015-06-12代继桓杨刚毅贾彦军罗小河冉文侠

中国老年学杂志 2015年12期

关键词：胰岛素小鼠血清

代继桓李伶杨刚毅任艳贾彦军罗小河冉文侠曾梦

(重庆医科大学检验医学院教育部临床检验诊断学重点实验室，重庆 400016)

KLF14基因过表达对改善Hepa1-6小鼠肝癌细胞胰岛素抵抗的作用

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(重庆医科大学检验医学院教育部临床检验诊断学重点实验室，重庆 400016)

目的探讨KLF14基因过表达对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胰岛素抵抗的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-QPCR)检测KLF14基因mRNA在健康C57BL/6J小鼠各组织的表达分布情况；构建小鼠KLF14基因重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-KLF14并转染Hepa1-6细胞，RT-PCR法检测KLF14基因mRNA的表达；Western印迹检测KLF14及p-AKT蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES2-EGFP-KLF14质粒；转染肝癌细胞48 h后，KLF14 mRNA和蛋白水平明显高于对照组和空载组(P<0.01)；转录水平上KLF14基因在小鼠体内普遍表达，其mRNA相对表达量由高到低依次为心脏、骨骼肌、肝脏、脂肪、小肠、肾脏、脑、肺、胃、脾、附睾；非转染组给予血清干预后，正常人血清处理组和糖尿病病人血清处理组无明显差异；而转染组给予血清干预后，糖尿病病人血清处理组p-AKT表达量较正常人血清处理组明显增加；在胰岛素刺激情况下，无论转染组或非转染组，给予PI3K抑制剂LY294002后，p-AKT表达受抑。结论 KLF14在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达，提示其可能在维持正常生理功能中发挥一定作用；KLF14基因过表达可促进AKT的活化，并且其增加胰岛素敏感性的作用在糖尿病状态下较正常人更为明显。

KLF14；Hepa1-6细胞；基因表达；胰岛素抵抗

胰岛素抵抗(IR)是肥胖、2型糖尿病(T2DM)、高血压、冠心病、动脉粥样硬化(AS)等疾病的共同病理生理基础。Kruppel-like factor(KLF)14是一种在人体组织中广泛表达的转录因子，在多个物种间具有高度保守性〔1〕。近年来，多项全基因组关联性研究(GWAS)发现，KLF14、甘油三酯(TG)、胆固醇(TG)水平、肥胖与T2DM的发生发展密切相关〔2，3〕。为了研究KLF14在IR中发挥的作用，本研究运用分子克隆技术，构建pIRES2-EGFP-KLF14真核过表达质粒，特异性提高KLF14基因的表达；通过免疫印迹检测胰岛素作用关键分子蛋白液酶B(AKT)的活化程度，进一步研究KLF14基因表达上调对肝细胞胰岛素敏感性的作用及其可能的分子机制。