益母草压制饮片的药学研究*

2015-06-01杨红梅王聪颖贺宝莹唐安玲

西部中医药 2015年10期

关键词：液相色谱仪益母草压制

杨红梅，王聪颖，曹蕾，贺宝莹，宋英，唐安玲

1成都中医药大学，四川成都610075;2成都中医药大学附属医院

益母草压制饮片的药学研究*

杨红梅1，王聪颖1，曹蕾1，贺宝莹1，宋英2△，唐安玲1

1成都中医药大学，四川成都610075;2成都中医药大学附属医院

目的：比较益母草饮片压制前后的煎出效果。方法：以盐酸益母草碱含量和干膏率为指标，通过复方煎煮，溶出曲线，单味煎煮比较两者水煎液的指标性成分的含量，比较两者差异。结果：压制饮片与传统饮片的水煎液的指标性成分的含量、煎出物等检测指标无明显差异。结论：压制饮片不影响有效成分的煎出，可保证汤剂煎煮质量。

益母草压制饮片；传统饮片；盐酸益母草碱；干膏收率

压制饮片是将传统饮片压制成规定剂量的几何体。从制备原理上看，用机械压制成规定质量的立方体，不需添加任何辅料，无润湿、干燥等其他工艺过程［1］，在一定程度上代替了传统的中药饮片，由益母草、当归、川芎、大蓟、赤芍、白茅根、牡丹皮组成的我院多年经验方，具有补益调经功效，用于月经不调等，疗效突出。益母草为全草类药材，由于密度较小、流动性差，普通饮片不利于定量包装和药房调剂。本实验选用益母草为研究对象，比较益母草压制饮片与传统饮片的煎煮质量及有效成分溶出，为压制饮片的质量标准研究提供参考。

1 材料

1.1 试验仪器 HP 1100高效液相色谱仪(配有DAD检测器、自动进样器、四元梯度泵、在线脱气装置，美国惠普公司提供)，Agilent Chem Station色谱工作站(美国安捷伦公司提供)；BP211D分析天平(十万分之一型，德国赛多利斯公司提供)。

1.2 试药益母草传统饮片(由四川省中药饮片有限公司提供，批号：120514)；益母草压制中药饮片(由四川省中药饮片有限提供，批号：120514)；盐酸益母草碱对照品 (由中国药品生物制品检定所提供，批号：111823-201202，含量以94.1%计算)；乙腈色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2. 方法与结果

2.1 益母草压制中药饮片含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱为ComatexC18(250mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.025 mol/L KH2PO4溶液(pH 3.5～4.0)(86.5∶13.5)；流速：1 mL/min；检测波长：277nm；柱温：25℃；进样量：10 μL。理论塔板数按盐酸益母草碱计应不低于6 000。

2.1.2 对照品的制备精密称取盐酸益母草碱1.55 mg，置25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度摇匀，即得(0.058 3 mg/mL)；精密吸取5 mL，置10 mL量瓶中加70%乙醇至刻度，摇匀，即得(0.02915mg/mL)；精密称取盐酸益母草碱1.48mg，置25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度摇匀，即得(0.055 71 mg/mL)。

2.1.3 供试品溶液制备取本品粉末(过3号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 样品含量测定按照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，由测定结果可知，益母草中药饮片盐酸益母草碱含量为0.97 60 mg/g，均符合《中国药典》2010年版一部272页“益母草”含量测定项下的有关规定。

2.1.5 线性范围考察按上述色谱条件，分别精密吸取盐酸益母草碱对照品溶液(0.058 3 mg/mL) 1，3，5，10，11μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，经计算，得线性回归方程Y=1 359.5X+43.115，r2=0.991 2，实验结果表明，在0.058 3～0.874 5 μg范围内，盐酸益母草碱峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.2 复方饮片煎煮质量比较

2.2.1 盐酸益母草碱含量测定

2.2.1.1 传统饮片复方样品溶液制备按照处方比例分别称取益母草600 g，当归200 g，川芎200 g，大蓟400 g，赤芍400 g，白茅根400 g，牡丹皮400 g，称取6份，其中3份分别加15倍量水，浸泡30分钟，第一次煎煮保持微沸15分钟，第二次煎煮保持沸腾10分钟，滤过，滤液浓缩并定容至7 000 mL，作为传统煎煮组；另3组分别加水10 000 mL，浸泡30分钟，煎煮15分钟，滤过，药液定容至7 000 mL，作为机器煎煮组。见图1。

图1 益母草复方煎煮液色谱图

2.2.1.2 定量压制复方样品溶液制备按照处方比例称取除益母草外传统饮片当归200 g，川芎200 g，大蓟400 g，赤芍400 g，白茅根400 g，牡丹皮400 g，益母草压制中药饮片600 g，称取6份，按照上述方法分别制备机器煎煮样品与传统煎煮样品。

2.2.1.3 复方阴性样品溶液按处方比例称取除益母草外药材200 g，同法制备缺益母草阴性样品溶液。见图2。

图2 复方煎煮(阴性)

2.2.2 专属性实验按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，结果供试品中盐酸益母草碱色谱峰与相邻色谱峰分离度＞1.5，理论塔板数按盐酸益母草碱峰计算不低于6 000，阴性无干扰。

2.2.3 方法学考察

2.2.3.1 精密度实验按照上述色谱条件，精密吸取盐酸益母草碱对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录测定，结果盐酸益母草碱对照品峰面积均值为449.95，RSD为0.63%，表明精密度良好。见图3。

图3 盐酸益母草碱对照品

2.2.3.2 稳定性实验按照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、6、8、10小时，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算含量，结果盐酸益母草碱峰面积均值为 171，RSD为2.90%，表明供试品溶液在10小时内稳定性较好。

2.2.3.3 重复性实验按“2.1.3”项下，分别制备供试品溶液6份，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录盐酸益母草碱色谱峰峰面积，计算含量，结果样品中盐酸益母草碱含量均值为0.0111，RSD为1.38%，表明实验重复性较好。

2.2.3.4 加样回收率实验精密称取已知含量的样品溶液1.5 mL(0.036 99 mg/mL)，共6份，分别精密加入盐酸益母草碱对照品溶液(0.05571mg/mL) 1 mL，按供试品制备方法及色谱条件，测定含量，计算回收率，结果盐酸益母草碱的加样回收率平均值为98.65%，加样回收率在95%～105%之间，RSD=2.16%，表明该方法的加样回收率较好。

2.2.4 干膏收率测定精密吸取样品溶液25mL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，结果传统煎煮与机器煎煮方法，益母草传统饮片与压制中药饮片复方水煎液中盐酸益母草碱含量及干膏收率均相近，无明显差异。

2.3 单味饮片煎煮质量比较分别称取益母草压制前后饮片各6份，每份600 g，分别加水煎煮2次，其中3份分别加15倍量水，浸泡30分钟，第一次煎煮保持微沸15分钟，第二次煎煮保持沸腾10分钟，滤过，滤液浓缩并定容至7 000 mL，作为传统煎煮组。另3组分别加水8 000 mL，浸泡30分钟，煎煮15分钟，滤过，药液定容至7 000 mL，作为机器煎煮组。

精密吸取上述样品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试液10 μL，注入液相色谱仪，计算盐酸益母草碱含量另精密吸取样品溶液25 mL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定质量，结果表明益母草传统饮片与压制中药饮片单味水煎液中盐酸益母草碱含量及干膏收率相近，无明显差异。

2.4 溶出曲线比较分别称取益母草压制前后饮片各100 g，加水1 000 mL(补加吸水量)，浸泡30分钟，分别于煎煮5，10，15，20，30，40，50，60分钟取样100 mL，并补充水体积，药液滤过，备用。精密吸取上述样品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试液10 μL，注入液相色谱仪，计算盐酸益母草碱含量另精密吸取煎煮不同时间点样品溶液各25 mL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定质量，结果见表1。

Pharmaceutical Research on YiMuCao Pressed Decoction Pieces

YANG Hongmei1,WANG Congying1,CAO Lei1,HE Baoying1,SONG Ying2△,TANG Anling11 Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China;
2 Teaching Hospital of Chengdu University of TCM

Objective:To compare the decoction effects of YiMuCao[Leonurus artemisia(Laur.)S.Y.Hu F] before and after pressing.Methods:By taking the contents of leonurine hydrochloride and dry extract yield as the indexes,the contents of indicative components in the decoctions were compared by decocting the compound,stripping curve and single decoction,to compare the difference between them.Results:There was no obvious difference in the comparison of detection indexes including the contents of indicative components in the decoction of pressed decoction pieces and traditional drug pieces,the extracts and others.Conclusion:Pressed decoction pieces wouldn't affect the extract of active ingredients and it could ensure the quality of the decoction.

YiMuCao pressed decoction pieces;traditional drug pieces;leonurine hydrochloride; dry extract yield