杨 简，范致星，李馨欣，彭家芹，姜玉蓉，陈 勇

(三峡大学第一临床医学院心内科，湖北宜昌 443003)

·论著·

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究*

杨 简，范致星，李馨欣，彭家芹，姜玉蓉，陈 勇

(三峡大学第一临床医学院心内科，湖北宜昌 443003)

目的 探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响及TLR4依赖的TLR4/PI3K/Akt信号通路介导的分子机制。方法 体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs，采用不同浓度HMGB1(0.1～1 000.0 ng /mL)处理，分为对照组(未经任何处理)、HMGB1组、HMGB1+TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)干预组，观察各组细胞活性及HMGB1对VSMCs迁移的影响；实时定量RT-PCR与Western blot分别检测TLR4、Akt、p-Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达；ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1(0.1～1 000.0 ng/mL)呈剂量依赖性促进VSMCs迁移(P<0.05)；经细胞活性测定，HMGB1在使用的浓度范围内对VSMCs未造成细胞毒性作用(P<0.05)；HMGB1(100 ng/mL)处理的VSMCs细胞组PI3K活性及Akt磷酸化水平明显增加(P<0.05)；经TLR4 siRNA转染发现，HMGB1引起的VSMCs 迁移明显减弱(P<0.05)，同样在PI3k抑制剂干预组，PI3K/Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs 迁移也被明显抑制(P<0.05)。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移，TLR4依赖的TLR4/PI3K/Akt信号通路参与了此过程，提示以TLR4依赖的PI3K/Akt途径为靶点，可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。

Toll样受体4；高迁移率蛋白B1；PI3K/Akt信号通路；血管平滑肌细胞

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的迁移是动脉粥样硬化和经皮冠状动脉介入治疗后血管再狭窄发生的关键环节[1]，其受多种生物学信号的调节，如细胞因子、生长因子、血管活性肽等，其中促炎介质发挥关键作用[2]。高迁移率蛋白B1(HMGB1)是一种有效的促炎因子，参与了多种心血管疾病的发生、发展[3]。在既往的研究中，HMGB1被认为是一个作用于VSMCs等不同细胞系的化学诱导物[4]，其主要与RAGE结合而促进细胞的迁移[5]。TLR4作为HMGB1的另一个受体，广泛表达于脉管系统，可通过激活细胞内的信号传导通路(如MAPK、JNK、NF-κB)诱导免疫和炎性反应[6]。本课题组前期研究发现TLR4/NF-κB信号通路能诱导HMGB1介导的血管内皮细胞激活[7]，而且有研究发现球囊损伤后的VSMCs TLR4表达明显增加[8]，这说明TLR4依赖的信号通路也可能参与了HMGB1介导的VSMCs迁移。……