王琼仙　刘佳　王利梅　赵远　王毅

[摘要]本研究观察了元肾颗粒连续灌胃3个月对大鼠的体重、血液学指标、尿常规、血清生物化学指标以及主要脏器指数和病理组织学的影响。结果表明：元肾颗粒大剂量（1292g生药/kg）、中剂量（748g生药/kg）、小剂量（432g生药/kg），所用剂量分别相当于临床拟用剂量（126g生药/日）的718倍、416倍和24倍，连续灌胃3个月和停药3周后未发现明显的毒性反应。雄性大剂量组从第3周起、中剂量组从第11周起、雌性大剂量组从第13周起，给药大鼠体重与对照大鼠体重相比即有显著差异；恢复期内，给药组大鼠体重增长明显。

[关键词]元肾颗粒；毒性实验；研究

[DOI]1013939/jcnkizgsc201547121

1试验目的

观察大鼠连续灌胃给予元肾颗粒3个月所产生的毒性反应及程度，以评价其临床用药的安全性。

2试验材料

（1）受试制剂：元肾浸膏，每1g相当于646g生药，成人日剂量195g（相当于126g生药），昆明禾润药物开发有限公司提供，批号：030226。

（2）动物：SD大鼠，雌雄各半；雄性平均体重为10330±739g，雌性平均体重为9962±816g。由昆明医科大学实验动物学部提供，合格证号：SCXK（滇）2011-0004。

（3）仪器：ALCYON 300全自动生化分析仪，美国雅培公司生产。CL4型半自动止凝血测定仪，德国BE公司产品。BP310S电子天平，北京赛多利斯天平有限公司生产。

（4）实验环境：云南省中医中药研究院动物实验屏障系统，SPF级，合格证号：滇实动证第2003002号。

3试验方法

31分组给药

大鼠随机分为4组：对照组元肾颗粒大、中、小剂量组。每组20只，雌雄各半。大剂量组给予1292g生药/kg的元肾浸膏，该剂量为最高可灌胃剂量，相当于人临床拟用剂量的718倍；中剂量组给予748g生药/kg的元肾浸膏，相当于人临床用量的416倍；小剂量组给予432g生药/kg的元肾浸膏，相当于人临床用量的24倍。大鼠适应试验环境一周后开始灌胃给药，每天2次，连续3个月，给药容量均为20ml/kg体重，每周按体重调整灌胃体积。给药3个月后，每组杀检14只（雌、雄各7只），进行各项指标检测，观察有无毒性反应。剩余大鼠停止给药3周后杀检，以观察有无继发性不良反应。

32观察指标

（1）一般状态：给药期间每日观察大鼠精神、行为、活动、排便等情况。给药期间及恢复期每日检测各只动物进食、进水量。

（2）体重：给药期间和恢复期每周称体重一次。

（3）血液学检查：大鼠给药期限结束后，放血处死，取血以止凝血测定仪测定血浆凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（PTT），血球计数仪测定白细胞总数（WBC、）和分类（淋巴细胞百分数LY、单核细胞百分数M0、中性粒细胞百分数NE）、红细胞总数（RBC）、网织红细胞计数（RC）、血红蛋白含量（Hgb）、血小板计数（PLT）、红细胞比积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板比积（PCT）、血小板分布宽度（FDW）。

（4）血清生物化学检查：上述大鼠取血样，离心分离血清，用全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶（LDH）、a一羟丁酸脱氢酶（HBDH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、肌酐（CR）、尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、甘油三酯（TG）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、尿酸（UA）共计十三项。

（5）尸体解剖和脏器指数：各组大鼠放血处死后，立即进行尸体解剖，肉眼观察各脏器有无病理改变，取出心、肝、脾、等16个脏器，剥离后分别称重，并计算脏器指数（g/100g）。

（6）病理组织学检查：将上述脏器放入10%中性甲醛溶液中固定，石蜡包埋、切片，经苏木素、伊红染色，再经脱水、透明、封固后光镜下观察；先对大剂量组、对照组大鼠的脏器进行检查，如果大剂量组发现异常，再对中、小剂量组脏器进行病理组织学检查。

（7）统计学处理：比较组间差异采用t检验。

4试验结果

（1）一般状态：三个给药组大鼠在给药期间，雄性大剂量组从给药第1周起、中剂量组从给药第9周起，进食量显著低于对照组；雌性大剂量组从给药第8周起、中剂量组从给药第10周起，进食量显著低于对照组，恢复期各给药组大鼠的进食量与对照组无显著差异。给药组大鼠的饮水量仅雄鼠的个别周次与对照组有差异。未见行为活动、排便、分泌等方面的毒性反应，各组动物无死亡。

（2）体重：给药期内，雄性大剂量组从第3周起、中剂量组从第11周起，雌性大剂量组从第13周起，给药大鼠体重与对照大鼠体重相比即有显著差异；恢复期内，给药组大鼠体重增长明显。

（3）血清生物化学检查：给药3个月后，大剂量组的LDH、ALT、GLu、CHOLTG，中剂量组的HBDH、ALT、AST、IBIL、TG、UA，小剂量组的HBDH、ALT、TBIL、DBIL，与对照组比较有显著性差异；恢复期后各给药组对照组比较无显著差异。

（4）血液学检查：给药3个月后，中、小剂量组的TT、RDW、MPV、PDW与对照组比较有显著差异，其他血液学指标各组间无显著差异；恢复期后，大、中剂量组的PTT与对照组比较有显著差异，其他血液学指标各组间无显著差异。

（5）尿常规检验：给药3个月及恢复期后，各组大鼠的尿常规检验未见显著差异。

（6）主要脏器检查：元肾颗粒给药组与对照组大鼠在给药3个月及恢复期结束后均进行尸体解剖，肉眼观察主要脏器未见明显异常。给药3个月，大剂量组与中剂量组的心脏系数、肝脏系数、肾脏系数、脑系数、胃系数、肾上腺系数、睾丸系数，均高于对照组。恢复期结束后各给药组脏器指数与对照组比较无显著差异。

（7）病理组织学检查：给药3个月，大剂量组与对照组比较无显著差异。

5结论

本试验根据《中药新药研究的技术要求》《中药新药研究指南》和《新药临床前安全性评价与实践》的要求，根据元肾颗粒的临床用量、疗程，确定大剂量和为人临床拟用剂量的倍数。连续给药三个月，按要求观察了各项指标。结果显示：元肾颗粒连续灌胃给药三个月对大鼠进食量、体重增长及心、肝、肾、胃、脑、睾丸、附睾、肾上腺的脏器系数有一定的影响，原因可能系给药浓度、剂量过大，导致动物摄食减少、体重增长缓慢。大剂量比中、小剂量影响显著，并且停药后逐渐恢复正常，表明其不良反应是可逆的；血液学及血清生物化学的某些指标显示给药组与对照组有差异，提示临床试验时应关注患者的消化系统功能及血液学检查。大剂量组的病理组织学检查未发现明显毒性反应。综上所述，元肾颗粒在受试剂量经口给药3个月，对大鼠无明显毒性作用。