珍稀药材三叶青种质资源遗传多样性的ISSR分析
2015-05-15华金渭吉庆勇吴剑锋
朱 波,华金渭,刘 昆,吉庆勇,吴剑锋,齐 川
(1.浙江省丽水市农业科学研究院,浙江 丽水 323000;2.浙江中医药大学,浙江 杭州 310053;3.浙江省丽水市中药材产业发展中心,浙江 丽水 323000)
三叶青是民间珍稀中药材,又名金线吊葫芦、石老鼠、蛇附子、石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石珠、土经丸,原植物为葡萄科(Vitaceae)崖爬藤属(Tetrastigma planch)植物三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg),块根或全草入药,主要分布于我国浙江、湖北、湖南、江西、重庆、四川、广东、福建、广西、贵州等地,具有清热解毒,祛风化痰,活血止痛的功能,临床主要用于治疗高热惊厥、腹痛、肺炎、哮喘、肝炎、肿瘤等症[1-4]。目前三叶青的研究报道主要集中于生药形态学、组织培养、化学成分、药理及临床应用等[5-10],而三叶青种质资源遗传多样性研究鲜有报道。
ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记即微卫星间DNA多态性,是由Zietkiewicz等[11]于1994年提出创建的分子标记技术,该技术稳定性好,多态性高,实验操作简便且快速,还可以揭示基因组水平的某些特征,且呈孟德尔式遗传,该技术一经问世就被广泛用于遗传多样性分析、品种分子鉴定和系统发生关系等研究[12-18]。本试验收集全国三叶青主产区种质资源24份,提取基因组DNA,筛选引物进行ISSR-PCR扩增,分析三叶青种质资源遗传多样性,以期为三叶青遗传图谱构建与分子辅助选育新品种提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试材料
2012年12月至2013年11月,收集浙江、江西、福建、广西、湖南、湖北等三叶青主分布区种质资源24份,除湖南怀化种质为人工栽培种质外,其余23份均为野生种质资源(表……
