陈辅辰

摘 要：本文通过对比几种常见凝胶的理化性质，详细介绍了葡聚糖凝胶的筛选及在FD-1-1项目中的应用。

关键词：葡聚糖凝胶；分配系数；凝胶处理；装柱；上样；洗脱

凝胶过滤层析是生化分离常用色谱技术的一种，凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当蛋白质分子通过装有凝胶颗粒的色谱柱时，根据它们分子大小不同而进行分离的技术。

1 葡聚糖凝胶技术的原理

凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的混合物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外，在柱内经过的路程较长移动速度较慢，最后被洗脱出来。

2 葡聚糖凝胶（Sephadex）的种类和性质

凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源和脱色。

SephadexG ：G 后的数字为凝胶吸水值的10倍。G 反应凝胶的交联程度、膨胀程度和分部范围。根据不同的吸水值主要有：Sephadex G-1O、Sephadex G-15、Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75、SephadexG-150、Sephadex G-200。

3 分配系数（Kd）：Ve=Vo+Kd·Vi

每个溶质分子在流动相和固定相之间有一个特定的分配系数。

Vo简称为外水体积，Vo等于被完全排阻的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子，如常用的蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床，即可测出柱床的外水体积Vo。……