刘欣春 李杰 裴磊 王森 彭云飞

摘 要：检测血管生成素1（angiopoietml，Angl）对体外培养脊髓微血管内皮细胞（spinal cord nucrovascular en-dothelial cell，SCMEC）屏障功能的调节机制。体外分离培养大鼠SCMEC及胶质细胞，通过双室培养系统建立体外血一脊髓屏障（blood-spinal cord barrier，BSCB）模型；分别用Angl及Angl+wortmannin（Akt抑制剂）处理培养细胞，Western-blot检测Akt及连接蛋白质的表达：放射自显影检测Akt激酶活性变化：测定跨内皮电阻（TEER）反映各组细胞屏障功能；细胞免疫荧光检测连接蛋白在细胞接触面的分布变化；免疫共沉淀实验分析连接蛋白之间的相互作用改变。结果显示，Angl处理组细胞Akt活性及TEER值均有明显升高，Angl处理后ZO-1及VE-cadherin在细胞连接处的分布增强，occludin/ZO-l、VE-cadherin/p-catenin之间的相互作用均较对照组显著增强，且以上Angl处理所引起的SCMEC功能改变均可被wortmannin所拮抗。表明Angl通过Akt活性调节SCMEC连接蛋白的分布及相互作用，从而影响体外BSCB的屏障功能。

关键词：血一脊髓屏障；血管生成素l（ Angl）；Akt

中图分类号：R33 8.2+1 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）03-0218-06 脊椎动物的血一脊髓屏障（ blood-spinal cordbamer，BSCB）是血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的延伸，是中枢神经系统特有的屏障结构。BSCB由脊髓微血管内皮细胞（spinal cord mi-crovascular endothelial cell，SCMEC）间的紧密连接及星形胶质细胞周足构成，可有效地阻止血液中的大分子进入脊髓实质，为中枢神经系统提供稳定的微环境[I]。现有研究表明，多种脊髓病变与BSCB屏障功能异常有关，如创伤性脊髓损伤[2，3]、放射性损伤[4] 、肌萎缩性脊髓侧索硬化症[5，6] 、感染[7J等。内皮细胞间的连接蛋白及细胞骨架是构成内皮细胞屏障的主要分子基础，其表达量、分布及相互作用的改变是导致内皮细胞通透性增高的直接原因[8] 。……