石青青，孙海翔

(南京大学医学院附属鼓楼医院 妇产科，江苏 南京 210008)

胚胎染色体的非整倍性改变可影响胚胎的发育［1］。临床上很多体外授精的胚胎在植入前体外培养的过程中即出现发育停滞，使用标准的形态学方法很难鉴别此胚胎染色体是否为非整倍性染色体，这需要使用植入前遗传学诊断技术来鉴定［2－3］。比较基因组杂交(comparative genomic hybridization，CGH)技术是在荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization，FISH)基础上发展起来的的一种分子细胞遗传学技术，仅需少量DNA 经过一次杂交就可以对全基因组进行全面的评估，该技术还无需细胞培养和预先了解需检测的染色体区域，但临床上为了减少胚胎的损伤，仅能取单个卵裂球进行PGD 检测，而单个卵裂球所包含的DNA量有限，不足以用于CGH 检测。全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)技术是一种非选择性扩增全基因组DNA 序列的技术，它能如实反映基因组全貌，并对DNA 大量复制［4］。本次研究应用WGA 技术中稳定性强、特异性高、保真性好的多重置换扩增法(MDA)结合CGH 技术对70枚植入前发育停滞卵裂球进行检测，筛查植入前胚胎非整倍性染色体，分析植入前发育胚胎发育停滞的病因机制。

1 对象和方法

1.1 研究对象

从生殖中心2011 年植入前6 ～8 细胞期发育停滞的胚胎中，随机选取70 枚，通过透明带激光打孔辅助卵裂球吸拉法，每枚胚胎各取出卵裂球一枚，分别放入0.5 mL PCR 管内。正常男性肝素抗凝新鲜外周血2 mL，经淋巴细胞分离液分离得到单个核淋巴细胞，梯度稀释于生理盐水内，于倒置显微镜下挑取单个淋巴细胞，放入0.5 mL PCR 管内，待用。……